[发明专利]一种基于21种特征成分含量的柑橘品种鉴别和系统分类的方法

权利要求书

1.一种基于21种特征成分含量的柑橘品种鉴别和系统分类的方法，其特征在于：选取柑橘果皮或果肉标准样，以标准样中17种酚类物质特征成分的含量，柠檬酸、酒石酸、奎尼酸、苹果酸4种有机酸含量各占总酸含量的百分比为指标建立样本矩阵，应用主成分分析法和聚类分析法，判定待测样的种类；所述柑橘是指宽皮橘、橙或柚；具体步骤如下：

（1）样品前处理：称取10个果实，将柑橘果皮、柑橘果肉样样品冷冻干燥，粉碎过60目，称取样品0.5g，加入20mL,50wt.%甲醇溶液进行超声提取20min，重复两次，合并上清加50wt.%甲醇定容至50mL，8000rpm/min离心，上清液经0.22μm有机滤膜过滤，备用；

（2）标准品溶液制备：分别称取HPLC色谱纯度在95%以上的柠檬酸、酒石酸、苹果酸、奎尼酸试剂之后用0.005mol/L的硫酸溶液制备该柠檬酸、酒石酸、奎尼酸、苹果酸4种有机酸不同浓度梯度在0.01~1mg/mL的标准样品溶液；17种酚类物质没食子酸、绿原酸、原儿茶酸、咖啡酸、对香豆酸、孟次草苷、阿魏酸、芥子酸、芦丁、苯甲酸、柚皮苷、橙皮苷、地奥司明、槲皮素、山奈酚、川陈皮素、橘皮素溶解于50%甲醇溶液，配置成1-100μg/mL标准液；

（3）色谱分析条件：使用包括四元泵、柱温箱、DAD检测器以及工作站所组成的HPLC仪器：

酚类物质检测条件：采用C18色谱柱，柱温为30~50℃，以乙腈和1%乙酸溶液的混合液为流动相梯度洗脱，流动相流速为0.8mL/min；检测波长为：280nm，检测时间为80min，进样量为5-20μL，梯度洗脱程序0-80min；乙腈：1%乙酸=12:88-50:50；

有机酸检测条件：分析柱：氢离子交换柱；流动相：水相A: 0.005mol/L的硫酸溶液；有机相B:乙腈；且A的体积百分比为96%，B的体积百分比为4%；流速：0.4mL/min；洗脱方式：等度洗脱；检测：210nm温度：50℃；进样体积：10μL；

（4）指标计算：采用外标法定量分析计算果实中17种酚类物质含量和4种有机酸的含量，有机酸比例=有机酸组份含量*100%/总酸；

（5）聚类分析、主成分分析：

标准样中17种特征成分的含量和4种有机酸含量占总酸含量的百分比为指标建立样本矩阵，为指标建立样本矩阵，应用主成分分析法和聚类分析法，选取主成分中权重最大的化学成分为区分因子，以区分因子作为自变量，计算同一类柑橘标准样之间的平方欧氏距离，获得标准样的平方欧氏距离范围，再测定待测样的区分因子的特征成分含量，分别计算其与柑橘标准样的平方欧氏距离范围，判定待测样的种类。