[发明专利]口蹄疫病毒温度敏感减毒株及其构建方法和用途

权利要求书

1.一种口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus)温度敏感减毒株的构建方法，包括：构建口蹄疫病毒全长cDNA感染性克隆质粒，经体外转录得到口蹄疫病毒基因组RNA，将口蹄疫病毒基因组RNA转染细胞并进行病毒的拯救；其特征在于：所述体外转录得到的口蹄疫病毒基因组RNA的IRES结构域4的K区环上的351位的胞嘧啶突变为鸟嘌呤或腺嘌呤，突变后K区环的碱基序列为³⁵¹GUUUAA³⁵⁶或³⁵¹AUUUAA³⁵⁶。

2.按照权利要求1所述构建方法得到的口蹄疫病毒温度敏感减毒株，其特征在于：用于拯救该温度敏感减毒株的全长cDNA感染性克隆质粒的微生物保藏编号是：CGMCCNO.13148。

3.权利要求2所述的口蹄疫病毒温度敏感减毒株含有的IRES突变体，其特征在于：其核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。

4.微生物保藏编号是CGMCC NO.13149的全长cDNA感染性克隆质粒经拯救后在构建口蹄疫病毒温度敏感减毒株中的用途。

5.以牛鼻病毒基因组的IRES结构域4置换口蹄疫病毒基因组的IRES结构域4所得到的嵌合IRES序列在构建口蹄疫病毒温度敏感减毒株中的用途，所述嵌合IRES序列的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示。

6.一种口蹄疫病毒温度敏感减毒株的构建方法，包括：构建口蹄疫病毒全长cDNA感染性克隆质粒，经体外转录得到口蹄疫病毒基因组RNA，将口蹄疫病毒基因组RNA转染细胞并进行病毒的拯救；其特征在于：将经体外转录得到口蹄疫病毒基因组RNA的IRES结构域4的K区用牛鼻病毒基因组RNA的IRES结构域4的K区进行了替换。

7.按照权利要求6所述构建方法得到的口蹄疫病毒温度敏感减毒株，其特征在于：用于拯救该口蹄疫病毒温度敏感减毒株的全长cDNA感染性克隆质粒的微生物保藏编号是：CGMCC NO.13150。

8.将口蹄疫病毒基因组的IRES结构域4的K区用牛鼻病毒基因组的IRES结构域4的K区进行替换得到的嵌合IRES序列，其特征在于：其核苷酸序列为SEQ ID No.3所示。

9.权利要求3所述的IRES突变体在制备口蹄疫减毒活疫苗中的用途、权利要求3所述的IRES突变体在制备口蹄疫RNA疫苗中的用途、或权利要求3所述的IRES突变体在制备口蹄疫灭活疫苗生产用种毒的用途；权利要求8所述的嵌合IRES序列在制备口蹄疫减毒活疫苗中的用途；权利要求8所述的嵌合IRES序列在制备口蹄疫RNA疫苗中的用途、或者权利要求8所述的嵌合IRES序列在制备口蹄疫灭活疫苗生产用种毒的用途。

10.权利要求2或7所述的口蹄疫病毒温度敏感减毒株的全长cDNA感染性克隆在构建口蹄疫RNA疫苗中的用途；或者，权利要求2或7所述的口蹄疫病毒温度敏感减毒株的全长cDNA感染性克隆经拯救后制备口蹄疫减毒活疫苗中的用途；或者权利要求2或7所述的口蹄疫病毒温度敏感减毒株的全长cDNA感染性克隆经拯救后制备口蹄疫灭活疫苗生产用种毒的用途。

11.权利要求2或7所述的口蹄疫病毒温度敏感减毒株在制备口蹄疫减毒活疫苗中的用途；或者权利要求2或7所述的口蹄疫病毒温度敏感减毒株在制备口蹄疫灭活疫苗生产用种毒的用途。