[发明专利]用于地中海贫血突变型基因检测的引物组、试剂盒、其应用及文库构建方法

说明书

一种用于地中海贫血突变型基因检测的引物组、试剂盒、其应用及文库构建方法，所述引物组包括SEQ ID NO:1至8所示的引物序列。利用本发明的引物组，能够同时检测多种突变类型，并能够发现新的突变类型；而且通过与第二代测序技术结合，使得检测成本大幅下降，通量大幅提高，具有明显的成本优势，利于地中海贫血突变型基因检测的普及应用。

技术领域

本发明涉及地中海贫血检测技术领域，具体涉及用于地中海贫血突变型基因检测的引物组、试剂盒、其应用及文库构建方法。

背景技术

地中海贫血(以下简称地贫)是一种常见的溶血性单基因遗传病，多发于中东、中亚、非洲、东南亚和中国南方等地区。导致地贫的分子机理是：珠蛋白基因发生缺陷使其编码的肽链一种或几种合成减少或缺失，致使血红蛋白的组成成分比例失衡，进而导致血红蛋白不稳定。根据缺陷的珠蛋白基因种类不同，地贫主要分为α地贫和β地贫。

α地贫是由于α珠蛋白基因的缺失或者突变导致α珠蛋白肽链合成受到抑制而引起的溶血性贫血疾病。α珠蛋白基因簇位于16p13.3，每条染色体各有2个α珠蛋白基因，一对染色体共有4个α珠蛋白基因。α珠蛋白基因的缺失或突变是产生α地贫的最常见原因，α地贫主要包括缺失型和非缺失型。

β地贫是由于β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白肽链缺陷或合成不足而引起的遗传性溶血性贫血疾病。β珠蛋白基因位于β珠蛋白基因簇，该基因簇定位于染色体11p15，β地贫的分子病理具有高度异质性，主要为β珠蛋白基因点突变、小的缺失或插入。

地贫患者长期贫血会导致脏器功能减退、导致心功能衰竭、肝脾肿大等，影响患者的生长发育，目前国内外尚无有效的治疗方法，只能通过定期输血等方法维持生命，给患者自身及家庭和社会带来沉重的负担。

控制地贫，预防是关键，通过对地贫高发人群的地贫筛查和婚育指导可有效降低重型地贫的发生率。目前地贫有多种筛查方法，但基因检测是诊断地贫的金标准，基因检测能够大大提高地贫检测的准确性，减少地贫的漏检率，这对地贫的诊治和预防有重要意义。

地贫常用基因检测方法包括：PCR-ASO(PCR反应结合寡核苷酸探针进行斑点杂交)，其优点是成本低，缺点是操作复杂、需要配套相应设备，只能检测15-20种已知突变；PCR-ARMS(等位基因特异性扩增法)，其优点是实验操作简单、成本低，缺点是检测突变种类少；PCR-RDB(PCR反应-反向点杂交)，其优点是成本低，缺点是只能检测15-20种已知突变、实验操作复杂；实时荧光定量PCR(Real-time PCR)，其优点是快速检测多种突变类型，缺点是仅能针对常见热点突变进行检测；PCR反应结合测序方法(PCR-sequencing)，其优点是检测多种突变类型、结果准确且可以发现新的突变类型，缺点是检测成本高、需要配套相应设备；Gap-PCR(跨越断裂点的PCR扩增法)，其优点是实验操作简单、成本低且目前最常用，缺点是只用于缺失型检测。

据珠蛋白数据库统计，全球已发现地贫类型超过300种，我国常规检测23-27种的地贫检测技术存在约2％-5％的漏检。

上述各种地贫基因检测方法均有不同程度的缺点，例如，Gap-PCR方法只能检测缺失型；各种突变型的检测方法中，PCR-ARMS可检测突变的种类少，PCR-ASO、PCR-RDB和实时荧光定量PCR方法虽然检测成本低，能够快速检测多种突变类型，但仅能针对常见热点突变进行检测(例如检测国内15-20种突变类型)，无法检测其他罕见突变型及新突变，存在一定的漏检率。而PCR反应结合测序方法不仅可以检测多种突变类型，还可以发现新的突变类型，在检测结果方面不失为最优选择，但也同样存在成本高的缺点。

发明内容

本发明提供一种用于地中海贫血突变型基因检测的引物组、试剂盒、其应用及文库构建方法，能够同时检测多种突变类型，并能够发现新的突变类型；而且检测成本大幅下降，通量大幅提高。