[发明专利]一种用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法

说明书

本发明提供一种用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法。该方法首先通过免疫磁珠特异性结合待测蛋白质，接着加入免疫脂质体并形成免疫磁珠‑待测蛋白质‑免疫脂质体复合物，然后进行磁性分离并对免疫脂质体进行破膜，最后应用LAMP扩增脂质体释放出的DNA而实现蛋白质的超敏检测。本发明提供的检测方法具有特异性高、灵敏度高、简便快速和易于操作等优点，可广泛用于生物医学领域各种蛋白质尤其是低丰度蛋白质的检测。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及各种蛋白质的超敏检测，具体为 一种用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法。

背景技术

蛋白质是生命活动得以实现的最关键的生物分子，生物体内蛋白质类型和 含量的变化往往反映出生命活动状态的改变，因此蛋白质的检测是生命科学和 医学领域里最基本的一种研究分析手段。在各种生物标本中，蛋白质的类型和 含量往往差别较大，有些蛋白质含量丰富，而有些蛋白质则含量甚微。蛋白质 的含量与其功能有关，但不代表含量低的蛋白质就不能发挥生理功能，现在我 们已证实很多微量蛋白质在生物的各种生命活动中发挥着非常重要的作用，所 以痕量蛋白质检测不仅在基因功能分析等基础性研究中有着重要作用，而且在 疾病的诊断、治疗和预后等临床活动中也有着十分重要的意义。

蛋白质的检测根据检测的特异性可分为总蛋白的检测和特异蛋白质检测。 总蛋白的检测是非特异性，通常是根据各种蛋白质共有的特性(如含氮量)来 进行检测，目前常用的总蛋白检测方法包括凯氏定氮法、紫外吸收法、染料法 和双缩脲法等。此外，还有针对白蛋白或球蛋白的检测方法，如检测白蛋白的 溴甲酚绿法和溴甲酚紫法，检测球蛋白的乙醛酸法等。特异蛋白质检测指某种 蛋白质的检测，通常采用特异性抗体或其它特异结合物来进行检测，目前常用 的检测方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法、电化学法和荧光免疫 法等。

痕量蛋白质的检测一般指某种特定蛋白质的检测，其检测方法也可称为蛋 白质超敏检测方法，目前常用的蛋白质超敏检测方法包括超敏ELISA、免疫 PCR、纳米探针技术、化学发光法和放射免疫分析法等。超敏ELISA和化学发 光法的灵敏度虽然高于普通的蛋白质检测方法，但是其分析灵敏度远不如它超 敏检测方法；放射免疫分析法灵敏度较好，但因使用放射性元素而逐渐被其它 方法所取代；免疫PCR通过将蛋白质检测转换为核酸检测，显著提高了蛋白质 检测的灵敏度，但因标记的核酸初始时即暴露于反应体系中，容易产生较高的 本底值而影响检测的准确度；纳米探针技术以纳米粒子共振光散射体系为基础 实现蛋白质的超敏检测，虽然具有操作简便、灵敏度高和利于后续分析等优点， 但是纳米粒子的制备过程中影响因素较多，因此该技术检测痕量蛋白质的稳定 性和重复性尚不够理想。鉴于上述现有的蛋白质超敏技术都存在某些方面的不 足，研发一种新的简便、快速、灵敏和准确的痕量蛋白质检测新方法迫在眉睫。

脂质体是一种主要由脂类构成的纳米颗粒，其脂质双分子层结构与生物体 的细胞膜类似，脂质层外表面可进一步连接蛋白质、核酸等其它分子，其包裹 的核心可容纳酶类、核酸、染料和药物等各种物质，因此脂质体作为一种药物 载体在药物研发应用中发挥了十分重要的作用。另一方面，脂质体作为一种信 号转换和放大载体在各种检测方法的构建中也起到了非常关键的作用。因此， 如果用免疫脂质体包裹DNA，那么就能够将蛋白质检测转换为DNA检测，再 通过后续具有超强信号放大能力的核酸扩增技术，就能够很好地实现各种蛋白 质的超敏检测，而这正是本发明所要研发的新痕量蛋白质检测方法的理论假设。

发明内容

有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提供一种用于蛋白质超敏检测的免 疫脂质体LAMP方法，该方法可用于细胞培养液、血液、脑脊液等标本中微量 蛋白质的准确检测。