[发明专利]一种用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法

权利要求书

1.一种用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)免疫磁珠-待测蛋白质复合物的形成：取待测标本于微量离心管中，加入混匀的免疫磁珠，室温放置20-40min后即可形成免疫磁珠-待测蛋白质复合物，所述的免疫磁珠由能特异性结合待测蛋白质的抗体和羧基化磁珠偶联形成；

(2)免疫磁珠-待测蛋白质-免疫脂质体复合物的形成：向步骤(1)中形成的免疫磁珠-待测抗原复合物中加入免疫脂质体复合物，轻轻混匀后室温放置20-40min，形成免疫磁珠-待测蛋白质-免疫脂质体复合物，所述的免疫脂质体由能特异性结合待测蛋白质的抗体和脂质体膜嵌合形成；

(3)磁性分离：将微量离心管放置在磁力架上2-10min进行磁吸附，然后用移液器吸走管内液体；

(4)人工破膜：向微量离心管中加入破膜剂，脂质体破坏后释放出包裹的DNA模板；

(5)LAMP检测：取适量DNA模板进行LAMP检测，通过分析模板DNA的量来确定标本中待测蛋白质的含量；

步骤(5)所述的免疫脂质体包裹的DNA为斑马鱼细胞周期蛋白A1编码基因部分序列；

步骤(5)所述LAMP检测的引物组包括如下引物：

外引物F3:5’-CCGAGAATGAGCAGCATAA-3’；

外引物B3:5’-CTTCTTCATCAGCCAATGAATG-3’；

内引物FIP:5’-ACAGTGGCTGTCTCAATCACACTCCAGGAGGTGTCTAAGC-3’；

内引物BIP:5’-TCCAACATTATTAGTGTTCGCTTCCAACACAAGAACACGAG-3’；

环引物LF:5’-TCACCAATTGACGCTCTGAA-3’；

环引物LB:5’-CTGCTAGTACTCGACGATGC-3’。

2.根据权利要求1所述的用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法，其特征在于，步骤(4)所述的破膜剂为Triton-X-100。

3.根据权利要求1所述的用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法，其特征在于，步骤(5)所述的LAMP检测扩增条件为：60-65℃等温反应60min进行扩增，然后90℃等温反应2min终止反应。

4.根据权利要求1所述的用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法，其特征在于，步骤(5)所述的LAMP检测为蛋白质定量检测或者蛋白质定性检测，蛋白质定量检测采用荧光检测方式，蛋白质定性检测时采用肉眼观察方式。

5.根据权利要求4所述的用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法，其特征在于，荧光检测方式需在反应体系中加入SYBR green荧光染料，肉眼观察方式需在反应体系中加入钙黄绿素。

6.根据权利要求1所述的用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体LAMP方法，其特征在于，步骤(5)所述的LAMP检测结果通过分析荧光定量PCR仪的实时荧光检测数据来进行判断，或通过观察PCR管内液体颜色的变化来判断结果。