[发明专利]一种耐热型长双歧杆菌及其筛选方法和菌粉制备方法

权利要求书

1.一种耐热型长双歧杆菌，其特征在于：所述耐热型长双歧杆菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.10452。

2.根据权利要求1所述的耐热型长双歧杆菌，其特征在于：所述耐热型长双歧杆菌在75℃条件下保温30分钟存活率可达到50％以上。

3.根据权利要求1至2任一项所述的耐热型长双歧杆菌的筛选方法，其特征在于：

S1、样品采集；

S2、条件性初步筛选：样品混合均匀梯度稀释后，移液至筛选培养基上涂布分离，厌氧恒温25-45℃培养12-72小时；然后挑选边缘光滑、呈乳白色隆起的菌落，反复划线镜检出菌体呈杆状、一端有时呈分叉状的革兰氏阳性菌落，反复纯化后继续厌氧恒温25-45℃培养12-72小时；

S3、抗逆性复筛：将菌泥加入稀释液混合均匀，然后置于40-80℃恒温水浴锅进行热激，计时热激5-30分钟，完成热激后迅速使用冷却水降温于20℃以下，将热激后含菌稀释液进行涂布或划线进行分离，挑选其中生长饱满且大小适中菌落于MRS培养基中扩培，重复将扩培后的发酵液进行离心、稀释、热激、涂布、筛选一系列循环，循环次数30-50次，通过检测其热激前后细胞存活率达到20-40％以上可完成条件初筛，得到耐热型长双歧杆菌，随后进行保藏。

4.根据权利要求3所述的耐热型长双歧杆菌的筛选方法，其特征在于：所述样品采集自健康成年人体粪便。

5.根据权利要求3所述的耐热型长双歧杆菌的筛选方法，其特征在于：步骤S2中，样品置于生理盐水中混合均匀梯度稀释。

6.根据权利要求3所述的耐热型长双歧杆菌的筛选方法，其特征在于：步骤S2中，所述筛选培养基包括10-20g/L的葡萄糖、5-20g/L的蛋白胨、10-20g/L的酵母浸膏、3-5g/L的无水乙酸钠、1-3g/L的磷酸氢二钾、1-3g/L的柠檬酸氢二铵、5ml/L的莫匹罗星锂盐，调节pH至6.8。

7.根据权利要求3所述的耐热型长双歧杆菌的筛选方法，其特征在于：步骤S3中，所述稀释液以质量分数计包括0.05-0.1％的氯化钠、0.005-0.01％的酪蛋白胨、0.4-0.8％的磷酸氢二钠、0.2-0.4％的磷酸二氢钾。

8.根据权利要求3所述的耐热型长双歧杆菌的筛选方法，其特征在于：步骤S3中，所述扩培中菌株的接种量为体积百分比1-10％，培养温度为25-45℃，培养时间为12-72小时。

9.根据权利要求1至2任一项所述的耐热型长双歧杆菌菌粉的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、菌株活化及扩培：将菌株于MRS培养基中进行接种，厌氧扩培；

S2、厌氧发酵：将菌株接种于MRS培养基中发酵，控制pH 5.5-6.5，发酵时间6-15小时，OD600达到6.0-12.0后降温；

S3、菌体收集及乳化：将发酵液离心后倾倒上清液，收集菌体后与保护剂按比例混合均匀后乳化；

S4、将乳化液冻干；

S5、粉碎后包装。

10.根据权利要求9所述的耐热型长双歧杆菌菌粉的制备方法，其特征在于：步骤S3中，将发酵液通过5000-15000rpm，20-30分钟离心后倾倒上清液，收集菌体，将菌泥与保护剂按照1:1.5-3.0比例进行配比，混合均匀后使用乳化器1000-5000rpm，乳化10-25分钟，充分混合后完成乳化。