[发明专利]一种生物降解用微生物的筛选方法有效
申请号: | 201711055849.9 | 申请日: | 2017-11-01 |
公开(公告)号: | CN107619826B | 公开(公告)日: | 2023-10-10 |
发明(设计)人: | 张朝正;赵津莹;徐迎;兰晓彤;李杰;郭聪聪;石悦婷;李晓瑾;蒋应豪;唐庆;马颖;朱奕;赵有珍 | 申请(专利权)人: | 天津科技大学 |
主分类号: | C12N13/00 | 分类号: | C12N13/00;C12N1/02 |
代理公司: | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人: | 李蕊 |
地址: | 天津市河*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 生物降解 微生物 筛选 方法 | ||
技术领域
本发明涉及生物降解技术领域,尤其是一种生物降解用微生物的筛选方法。
背景技术
随着工业化的加快,污染物的排放变得越来越多和越来越复杂,许多以前没有出现的污染物开始逐渐被发现。而这些新型的污染物有一个共同的特点就是难于生物降解。
传统的活性污泥法对于这些微生物的降解存在困难,如何快速筛选有效的微生物在环保领域变得紧迫起来。国内外对该类微生物的筛选方法的研究主要集中在传统的驯化筛选上,包括:
天然驯化-比如在某污染地点附近(酸,盐碱或者重金属),在它周围本来微生物是多种多样的,但是随着污染物对微生物的生长抑制和毒害作用,大部分的微生物被抑制生长或者杀死,只有部分能适应或者产生变异的微生物留下来,成为优势菌群,这就是天然驯化;
人工驯化-就是在培养过程中,逐步加入某种物质,让细菌循序渐进的适应这个繁殖环境,从而驯化出对此种物质耐受或者能降解的微生物群体和种类。
由于这些污染物的生物利用度低,筛选过程变得特别缓慢。各国研究人员一直在探索加快微生物筛选的方法。目前报道的筛选生物降解用微生物的方法均存在费时、费力、降解效果不佳的缺点,不能满足当前环境生物降解用微生物的获得和应用要求。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种生物降解用微生物的筛选方法。
为解决上述技术问题,本发明的技术方案是:
一种生物降解用微生物的筛选方法,将采集到的活性污泥或土样接种到唯一碳源培养基中,培养后转入一个电场辅助筛选装置中,培养过程中同时施以电压使目标菌株聚集在电极板上,从电极板上得到目标微生物。
优选的,上述生物降解用微生物的筛选方法,具体步骤如下:
(1)菌株的富集培养:将采集到的活性污泥或土样接种到唯一碳源培养基中培养;
(2)菌种的初筛:将富集培养物转接入新鲜的唯一碳源培养基中,将转接后的新鲜培养液转入电场辅助筛选装置中培养,至电极板上出现聚集的菌体;
(3)菌种的复筛:将电极板上聚集的菌体转移到新鲜的唯一碳源培养基中再次筛选;
(4)重复步骤(2)-(3)直至得到纯的菌株,将菌种保藏待用。
优选的,上述生物降解用微生物的筛选方法,对于所述步骤(4)筛选得到的菌株可进行:
菌种的考察:将筛选得到的菌株接种到唯一碳源培养基中(例,30℃下培养),考察菌株对目标污染物的降解效果;
实际环境应用:将经过考察的菌株接种到含有目标污染物的实际环境中(污水、土壤等)考察所述菌株对目标污染物的降解效果。
优选的,上述生物降解用微生物的筛选方法,具体步骤如下:
(1)菌种富集培养:将采集到的活性污泥或土样接种到唯一碳源培养基中,30℃下培养24-48h至浑浊;
唯一碳源培养基组成:Na2HPO4,2.00g;KH2PO4,2.00g;NH4Cl,0.4g;MgSO4 0.20g;目标污染物,3~8.00g;2mL的微量元素液;水定溶到1L,pH 7.0;其中,微量元素液配置:每H3BO3 0.232g,ZnSO4﹒7H2O 0.174g,FeSO4(NH4)2SO4﹒6H2O 0.116g,CoSO4﹒7H2O 0.096g,(NH4)6Mo7O24﹒4H2O 0.022g,CuSO4﹒5H2O 8mg,MnSO4﹒4H2O 8mg,水定溶到1L(不调pH);
(2)菌种的初筛:将富集培养物以10%的接种量转接入新鲜的唯一碳源培养基中,将转接后的新鲜培养液转入电场辅助筛选装置中,在30℃条件下培养至电极板上出现聚集的菌体(所有微生物的培养和操作均在无菌条件下完成);
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