[发明专利]一种生物降解用微生物的筛选方法

权利要求书

1.一种生物降解用微生物的筛选方法，其特征在于：将采集到的活性污泥或土样接种到唯一碳源培养基中，培养后转入一个电场辅助筛选装置中，培养过程中同时施以电压使目标菌株聚集在电极板上，从电极板上得到目标微生物。

2.根据权利要求1所述的生物降解用微生物的筛选方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)菌株的富集培养：将采集到的活性污泥或土样接种到唯一碳源培养基中培养；

(2)菌种的初筛：将富集培养物转接入新鲜的唯一碳源培养基中，将转接后的新鲜培养液转入电场辅助筛选装置中培养，至电极板上出现聚集的菌体；

(3)菌种的复筛：将电极板上聚集的菌体转移到新鲜的唯一碳源培养基中再次筛选；

(4)重复步骤(2)-(3)直至得到纯的菌株，将菌种保藏待用。

3.根据权利要求2所述的生物降解用微生物的筛选方法，其特征在于：对于所述步骤(4)筛选得到的菌株可进行：

菌种的考察：将筛选得到的菌株接种到唯一碳源培养基中，考察菌株对目标污染物的降解效果；

实际环境应用：将经过考察的菌株接种到含有目标污染物的实际环境中考察所述菌株对目标污染物的降解效果。

4.根据权利要求2所述的生物降解用微生物的筛选方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)菌种富集培养：将采集到的活性污泥或土样接种到唯一碳源培养基中，30℃下培养24-48h至浑浊；

唯一碳源培养基组成：每Na₂HPO₄,2.00g；KH₂PO₄,2.00g；NH₄Cl,0.4g；MgSO₄ 0.20g；目标污染物,3～8.00g；2mL的微量元素液；水定溶到1L，pH 7.0；其中，微量元素液配置：H₃BO₃0.232g，ZnSO₄﹒7H₂O 0.174g，FeSO₄(NH₄)₂SO₄﹒6H₂O 0.116g，CoSO₄﹒7H₂O 0.096g，(NH₄)₆Mo₇O₂₄﹒4H2O 0.022g，CuSO₄﹒5H₂O 8mg，MnSO₄﹒4H₂O 8mg，水定溶到1L(不调pH)；

(2)菌种的初筛：将富集培养物以10％的接种量转接入新鲜的唯一碳源培养基中，将转接后的新鲜培养液转入电场辅助筛选装置中，在30℃条件下培养至电极板上出现聚集的菌体；

(3)菌种的复筛：将电极板上的菌体用无菌棉签洗到新鲜的唯一碳源培养基中，30℃条件下培养至菌体OD₆₀₀＝1.5-2时，将该培养液以10％的接种量接种到装有200mL新鲜的唯一碳源培养基的电场辅助筛选装置中，按照步骤(2)进行培养；

(4)重复步骤(2)-(3)直至得到纯的菌株，将菌种保藏待用。

5.根据权利要求4所述的生物降解用微生物的筛选方法，其特征在于：所述步骤(2)中电场辅助筛选装置的阴、阳两极之间加3-12v的电压。

6.根据权利要求4所述的生物降解用微生物的筛选方法，其特征在于：所述电场辅助筛选装置是一个两端带有铂电极板的微生物培养装置，外接一直流电源，可改变直流电源的电压，实现3-12V范围内的实验参数变化。

7.根据权利要求4或6所述的生物降解用微生物的筛选方法，其特征在于：所述电场辅助筛选装置包括阴极槽、阳极槽、连接液桥和一对外接直流电源的铂电极板，所述阴极槽、阳极槽和连接液桥将该筛选装置分为三部分，所述连接液桥置于阴极槽和阳极槽中部，该连接液桥上方的水域深度小于阴极槽和阳极槽的水域深度，所述一对铂电极板的阴极板置于阴极槽内、阳极板置于阳极槽内。

8.根据权利要求7所述的生物降解用微生物的筛选方法，其特征在于：所述电场辅助筛选装置的具体操作过程如下：

(1)把富集培养液以10％的接种量接种到含有200mL新鲜培养基的电场辅助筛选装置中；

(2)把电场辅助筛选槽置于30℃培养箱中，接通电场辅助筛选槽的两端电源，使阴、阳两个铂电极板之间产生一个稳定的电场，通过改变外加电压调节电场强度；

(3)升压程序为：初始3-5V保持5h，然后调到5-8V保持5h，然后升到10-12v一直保持到电极板上出现菌体，电极板周围培养液变浑浊。