[发明专利]一种改良分支杆菌染色液及染色方法

说明书

本发明公开了一种改良分支杆菌染色液，所述染色液由氧化液、初染液、脱色液和复染液组成；所述氧化液采用H₂O₂溶液或H₅IO₆溶液，所述初染液采用碱性品红溶液。本发明为非荧光染色，成本较低，操作简单，对人体无害，经氧化液氧化后进行染色，从而使碱性品红与抗酸杆菌结合更加牢固，染出的片子不但颜色鲜艳，而且可以长期保存。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种改良分支杆菌染色液及染色方法。

背景技术

近年来由于获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的流行，结核分枝杆菌耐药菌株的出现，免疫抑制剂的应用，吸毒、贫困及人口流动等因素，结核病的流行在世界有卷土重来的趋势。结核病又成为了全球范围内重大的公共卫生问题，对病变组织进行抗酸染色，查找抗酸染色阳性结核分枝杆菌仍然是诊断结核病有效和准确的重要方法之一，但传统的Ziehi-Neelsen抗酸染色法在不同医院操作差异较大，阳性率较低，对诊断造成了一定的困难。十九世纪八十年代Ziehi与Neelsen共同发明了分枝杆菌抗酸染色法，在以后的一百多年来国内来诸多学者对该方法进行了诸多改良，其中以荧光染色法(即金胺“O”法)敏感性好，阳性率高，但由于：其一，荧光法需配备荧光显微镜，荧光显微镜价格较高，目前大多数医院及疾控尚未配备该设备；其二，荧光显微镜需使用高压汞灯(或氙灯)作为激发光源，使用时产生大量摄像对人体有一定损伤；其三，染片后需要及时观察，不能保存涂片，故一直未能很好的推广。

分枝杆菌是一种抗酸菌，抗酸菌是一类细胞壁中含有大量分枝菌酸等蜡质的特殊革兰氏阳性菌，一般不易着色，但是若经加温或延长染色时间，被碱性品红染色后就不易再被盐酸乙醇溶液脱色。传统的Ziehi-Neelsen抗酸染色法正是因为抗酸菌的蜡质屏障，即使加热或者延长时间仍然不能良好牢固着色，造成阳性率偏低。

发明内容

本发明针对上述技术问题，目的在于提供一种改良分支杆菌染色液及染色方法，为非荧光染色，成本较低，操作简单，对人体无害，经氧化液氧化后进行染色，从而使碱性品红与抗酸杆菌结合更加牢固，染出的片子不但颜色鲜艳，而且可以长期保存。

本发明通过下述技术方案实现：

一种改良分支杆菌染色液，所述染色液由氧化液、初染液、脱色液和复染液组成；所述氧化液采用H₂O₂溶液或H₅IO₆溶液，所述初染液采用碱性品红溶液。

优选地，所述H₂O₂溶液为：体积百分含量为3％～10％的H₂O₂水溶液。

优选地，所述H₅IO₆溶液为质量百分含量为5％～20％的H₅IO₆水溶液。

优选地，所述初染液的组成为：碱性品红、乙醇、蒸馏水和渗透剂，所述渗透剂采用高分子量嵌段共聚物溶液。

优选地，所述高分子量嵌段共聚物溶液包括DISPERBYK-2200或DISPERBYK-180。

优选地，所述初染液组成配比为：碱性品红2.0g～5.0g，乙醇200～400mL，蒸馏水600～800mL，DISPERBYK-2200或DISPERBYK-180 20～100mL。

优选地，所述脱色液采用3％～5％的盐酸乙醇溶液。

优选地，所述复染液采用次甲基蓝溶液，组成为：次甲基蓝3.0～6.0g、乙醇200～400mL、蒸馏水600～800mL、KOH 0.05～0.20g。

基于上述一种改良分支杆菌染色液的染色方法，包括以下步骤：