[发明专利]一种双靶点特异性T淋巴细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种双靶点特异性T淋巴细胞，包括Mesothelin抗原受体和NY‑ESO‑1抗原受体，所述Mesothelin抗原受体为嵌合抗原受体，所述NY‑ESO‑1抗原受体为基因修饰抗原受体，其中Mesothelin抗原受体的编码基因序列如SEQ ID NO：1所示，NY‑ESO‑1抗原受体的编码基因序列为SEQ ID NO：2所示。本发明还提供了一种双靶点特异性T淋巴细胞的制备方法和应用。本发明提供的双靶点特异性T淋巴细胞可以适用于两个肿瘤靶点，增强了对癌细胞的识别，避免癌细胞出现靶点逃逸，扩大了免疫细胞的杀伤谱。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种双靶点特异性T淋巴细胞及其制备方法和应用。

背景技术

免疫细胞治疗是现有科技中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，其治疗肿瘤具有特异性强、几乎无毒副作用的巨大优势弥补了传统疗法的弊端，在国内外已经用于临床治疗恶性肿瘤，并在白血病、骨髓瘤、淋巴瘤等血液系统肿瘤中取得了卓越的临床疗效，被认为是二十一世纪肿瘤综合治疗模式中最有发展前途的一种治疗手段。

嵌合抗原受体T细胞技术(CAR-T)以及基因修饰的T细胞受体技术(TC R)作为当前过继性细胞回输治疗技术两大最新的免疫细胞技术，因其能够在体内能激活自身免疫系统，持续性地靶向肿瘤细胞进行杀伤，最终达到完全清除恶性肿瘤细胞，受到广泛的关注和研究。CAR-T和TCR-T原理相似，其中，C AR-T的肿瘤识别蛋白为人工设计，因此可以不依赖于主要组织相容性复合体等人体正常免疫识别体系，但是无法识别表达在肿瘤内部的靶点，在实体瘤方面的疗效还十分有限；而TCR-T的肿瘤识别模式是通过改造T细胞本身的T细胞受体，增强其对肿瘤的亲和力，比CAR-T更加“天然，”但其单独使用，在肿瘤杀伤能力方面也很有限，特别是对于多种肿瘤抗原同时出现的情况，在复杂的肿瘤微环境中，其杀伤肿瘤细胞的能力被大大降低，限制了其临床应用。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种双靶点特异性T淋巴细胞及其制备方法和应用。本发明提供的双靶点特异性T淋巴细胞可以适用于两个肿瘤靶点，增强了对癌细胞的识别，避免癌细胞出现靶点逃逸，扩大了免疫细胞的杀伤谱。

第一方面，本发明提供了一种双靶点特异性T淋巴细胞，包括Mesothelin抗原受体和NY-ESO-1抗原受体，所述Mesothelin抗原受体为嵌合抗原受体，所述N Y-ESO-1抗原受体为基因修饰抗原受体，所述Mesothelin抗原受体的编码基因序列如SEQ ID NO：1所示，所述NY-ESO-1抗原受体的编码基因序列为SEQ ID NO：2所示。

其中所述Mesothelin抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

其中所述NY-ESO-1抗原受体的氨基酸序列为SEQ ID NO：4所示。

具体地，所述Mesothelin抗原受体的编码基因包括Mesothelin单链抗体、CD8α铰链区、CD8TM区、4-1BB信号区和CD3ζ胞内信号区基因片段。

具体地，所述NY-ESO-1抗原受体的编码基因包括NY-ESO-1单链抗体、CD8α铰链区、CD8TM区、4-1BB信号区和CD3ζ胞内信号区基因片段。

第二方面，本发明提供了一种重组慢病毒载体，所述重组慢病毒载体包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：2所示的DNA分子。

可选地，所述重组慢病毒载体包含核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ I D NO：2所示的DNA分子。采用重组慢病毒载体感染T淋巴细胞，可得到如本发明第一方面所述的双靶点特异性T淋巴细胞。

可选地，重组慢病毒载体分别包含核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的D NA分子、如SEQ ID NO：2所示的DNA分子，采用这两种重组慢病毒载体共同感染T淋巴细胞，也可得到如本发明第一方面所述的双靶点特异性T淋巴细胞。