[发明专利]一种双靶点特异性T淋巴细胞及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201711015103.5 | 申请日： | 2017-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN109706120A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 张宏玲 | 申请（专利权）人： | 深圳宾德生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫;熊永强 |
| 地址： | 518000 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗原受体 靶点 制备方法和应用 癌细胞 编码基因序列 编码基因 基因修饰 免疫细胞 嵌合抗原 肿瘤靶点 杀伤 | ||
1.一种双靶点特异性T淋巴细胞，其特征在于，包括Mesothelin抗原受体和NY-ESO-1抗原受体，所述Mesothelin抗原受体为嵌合抗原受体，所述NY-ESO-1抗原受体为基因修饰抗原受体，所述Mesothelin抗原受体的编码基因序列如SEQ ID NO：1所示，所述NY-ESO-1抗原受体的编码基因序列为SEQ ID NO：2所示。
2.如权利要求1所述的双靶点特异性T淋巴细胞，其特征在于，所述Mesot helin抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
3.如权利要求1所述的双靶点特异性T淋巴细胞，其特征在于，所述NY-ES O-1抗原受体的氨基酸序列为SEQ ID NO：4所示。
4.如权利要求1所述的双靶点特异性T淋巴细胞，其特征在于，所述Mesot helin抗原受体的编码基因包括Mesothelin单链抗体、CD8α铰链区、CD8TM区、4-1BB信号区和CD3ζ胞内信号区基因片段。
5.如权利要求1所述的双靶点特异性T淋巴细胞，其特征在于，所述NY-ES O-1抗原受体的编码基因包括NY-ESO-1单链抗体、CD8α铰链区、CD8TM区、4-1BB信号区和CD3ζ胞内信号区基因片段。
6.一种重组慢病毒载体，其特征在于，所述重组慢病毒载体包括核苷酸序列如SEQ IDNO：1和/或SEQ ID NO：2所示的DNA分子。
7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含如权利要求6所述的重组慢病毒载体。
8.一种双靶点特异性T淋巴细胞的制备方法，其特征在于，包括：
(1)构建pWPXLD-CAR-Mesothelin重组质粒，通过氨基端到羧基端顺次拼接人信号肽、靶向Mesothelin单链抗体、CD8α铰链区、CD8TM区、4-1BB信号区、CD3ζ胞内信号区构成CAR-Mesothelin序列，所述CAR-Mesothelin序列如SEQ ID NO:1所示，并连接pWPXLD载体；
(2)构建pWPXLD-TCR-NY-ESO-1重组质粒，通过氨基端到羧基端顺次拼接人信号肽、靶向NY-ESO-1单链抗体、CD8α铰链区、CD8TM区、4-1BB信号区、CD3ζ胞内信号区构成TCR-NY-ESO-1序列，所述TCR-NY-ESO-1序列如SEQ ID NO:2所示，并连接pWPXLD载体；
(3)包装所述pWPXLD-CAR-Mesothelin重组质粒和所述pWPXLD-TCR-NY-ESO-1重组质粒，得到重组慢病毒；
(4)将所述重组慢病毒转染CD3阳性T淋巴细胞；
(5)分离并获取所述双靶点特异性T淋巴细胞。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述包装所述pWPXLD-CAR-Mesothelin重组质粒和所述pWPXLD-TCR-NY-ESO-1重组质粒，得到重组慢病毒，包括如下步骤：
将所述pWPXLD-CAR-Mesothelin重组质粒和所述pWPXLD-TCR-NY-ESO-1重组质粒分别与包膜质粒和包装质粒共转染宿主细胞进行所述重组慢病毒的构建。
10.一种如权利要求1-5任一项所述的或如权利要求8-9任一项所述的制备方法制得的双靶点特异性T淋巴细胞、如权利要求6所述的重组慢病毒载体或如权利要求7所述的宿主细胞在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗恶性肿瘤的药物中的应用。
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