[发明专利]一种具有降血压降血脂功效的绞股蓝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，特别是涉及一种具有降血压降血脂功效的绞股蓝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法。

背景技术

间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞，MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。

如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有降血压降血脂功效的绞股蓝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种具有降血压降血脂功效的绞股蓝生物活性物质与人源干细胞活性因子的制备方法，该方法包括如下步骤：

S1、人源间充质干细胞体外培养；

S2、细胞培养至若干小时后，收集上清至离心管，过滤上清除菌；

S3、加入生理盐水继续培养12小时，破碎细胞离心过滤膜得到干细胞提取液；

S4、绞股蓝中提取粗糖；

S5、粗糖提纯得到多糖粉末；

S6、将干细胞提取液与多糖粉末按照质量比5-6：1充分混合即得。

进一步地，所述S1的具体步骤为，取人源间充质干细胞复苏后，用生理盐水重悬，悬液接种于完全培养基中，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养，培养24h后第一次换液并去除贴壁细胞，之后每隔2d换液一次，当细胞生长至85％汇合度后以1：2比例进行传代培养。

进一步地，所述完全培养基为DF12培养基，所述培养基中含体积分数为2％胎牛血清、40％MCDB201、10μg/L血小板衍生生长因子、10μg/L碱性成纤维细胞生长因子、10μg/L表皮生长因子。

进一步地，所述S4的具体步骤为，称取绞股蓝破碎后，加入95％乙醇溶解后回流提取，常温挥发乙醇得到绞股蓝粉末，将绞股蓝粉末分散于蒸馏水中，提取收集上清液，将上清液减压浓缩至原体积的1/3，离心除去沉淀，上清液加入乙醇溶液，静置、离心得到白色絮状沉淀，将白色絮状沉淀分散于无水乙醇溶液中，充分搅拌后离心，沉淀真空干燥得到粗糖粉末。

进一步地，所述S5中的具体步骤为，将粗糖粉末分散于蒸馏水中，4℃静置12-16h后离心，上清液加入至氯仿-正丁醇混合溶液中，固液比为5-6：1，其中所述混合溶液中氯仿与正丁醇的体积比为5：1，混合溶液离心得到多糖粉末。

进一步地，一种具有降血压降血脂功效的绞股蓝生物活性物质与人源干细胞活性因子的制备方法，其特征在于，干细胞提取液与多糖粉末按照质量比5-6：1充分混合后得到。

本发明具有以下有益效果：

本发明将人源与植物源干细胞性质生物活性提取物进行配伍，在发挥各自优势的基础上协同作用，使之发挥更大的综合效应，所制备的组合物治疗高血压、高血脂、高血糖，脂肪肝等症。有消炎解毒、止咳祛痰、保肝解毒、降血压、降血脂血糖的功效。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

具体实施方式

本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明为一种具有降血压降血脂功效的绞股蓝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，该方法具体步骤如下：

实施例1

S1、取人源间充质干细胞复苏后，用生理盐水重悬，悬液接种于完全培养基中，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养，培养24h后第一次换液并去除贴壁细胞，之后每隔2d换液一次，当细胞生长至85％汇合度后以1：2比例进行传代培养；

所述完全培养基为DF12培养基，所述培养基中含体积分数为2％胎牛血清、40％MCDB201、10μg/L血小板衍生生长因子、10μg/L碱性成纤维细胞生长因子、10μg/L表皮生长因子；

S2、细胞培养至若干小时后，收集上清至离心管，0.22μm滤膜过滤上清除菌；