[发明专利]一种具有显著辅助抗肿瘤活性的灵芝子实体精制多糖及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有抗肿瘤活性的灵芝子实体精制多糖组合物，其特征在于，所述组合物由质量比为500:10的灵芝子实体精制多糖和紫杉醇组成；所述灵芝子实体精制多糖主要是由甘露糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖7种单糖组成的杂多糖，每100g灵芝子实体精制多糖分别含甘露糖2.72g、氨基葡萄糖0.79g、葡萄糖醛酸1.39g、葡萄糖43.71g、半乳糖3.62g、木糖0.90g、岩藻糖1.82g，仅含一个级分，重均相对分子量为8098D，大于5KD分子量的累计切片重量面积占61.18％，分子量分布指数D为1.42，属于窄分布；BCA法测定灵芝子实体精制多糖中的蛋白质含量23.53％，蒽酮-硫酸法测定的多糖含量68.08％；

所述灵芝子实体精制多糖的提取方法包括以下步骤：

(1)热水动态提取粗多糖：取经酒精提取后再干燥的灵芝子实体残渣，加入残渣重量10～30倍的纯化水，通蒸汽，搅拌或间歇启动料液泵强制逆流循环，直到维持微沸时间达到2～4h后关闭蒸汽；

(2)粗滤工艺实现渣液分离：提取完成后，用过滤精度0.5～5μm的板框过滤器或袋式过滤器进行粗滤，残渣按步骤(1)方法重复提取1～2次并再次粗滤，合并粗滤液；

(3)精滤工艺实现药液澄清并去除热溶冷析的超大分子杂质：粗滤液用200～800nm的管式陶瓷微滤膜或过滤精度0 .1～0 .22μm的微孔折叠式滤芯进行精滤澄清，得到澄清液；

(4)串联树脂床吸附工艺实现脱蛋白脱色：澄清液采用串联聚酰胺树脂和D392阴离子树脂脱蛋白脱色，先流经聚酰胺树脂床，后流入阴离子树脂床；按投药量计，每kg子实体残渣最低配备250mL聚酰胺树脂和50mLD392阴离子树脂，聚酰胺树脂柱装填高度为1～2米，阴离子树脂柱床高度20～40cm，用醋酸或柠檬酸预调澄清液pH值到4.5～6.5，上样吸附流速为总柱床的4～10BV/h，收集流出液；

(5)膜超滤工艺实现目标多糖的浓缩并去除小分子水溶性杂质：流出液用超滤膜进行浓缩得到浓缩液，超滤膜的截留分子量为3500～5000D；

(6)干燥工艺：浓缩液采用醇沉后热风干燥或真空干燥，或直接喷雾干燥，即得灵芝子实体精制多糖。

2.一种具有抗肿瘤活性的灵芝子实体精制多糖组合物的制备方法，其特征在于，所述组合物由质量比为500:10的灵芝子实体精制多糖和紫杉醇组成，所述灵芝子实体精制多糖的制备方法包括以下步骤：

(1)热水动态提取粗多糖：取预先经食用酒精提取后再干燥的灵芝子实体残渣适量，加入残渣重量10～30倍的纯化水，通蒸汽，以10～30r/min速度搅拌或每间隔20～40min启动料液泵强制循环3～8min，直到维持微沸时间达到2～4h后关闭蒸汽；

(2)粗滤工艺实现渣液分离：提取完成后，冷却至50℃以下，抽出上清液，用过滤精度0.5～5μm的板框过滤器或袋式过滤器进行粗滤，残渣按步骤(1)方法重复提取1～2次并再次粗滤，合并粗滤液；

(3)精滤工艺实现药液澄清并去除热溶冷析的超大分子杂质：粗滤液用200～800nm的管式陶瓷微滤膜或过滤精度0.1～0.22μm的微孔折叠式滤芯进行精滤澄清，管式陶瓷微滤膜的操作工艺参数为温度40～60℃，操作压力0 .30～0 .50MPa，膜面流速3～4.5m/s，透过液通量120～300LMH，残液剩余30L时，加纯化水30L稀释，继续澄清操作至残液剩余30L，再重复一次稀释澄清操作，以尽可能保证目标多糖全部通过，降低工艺损耗；

(4)串联树脂床吸附工艺实现脱蛋白脱色：澄清液采用60～100目聚酰胺树脂和D392树脂分别装填成柱床，并串联在一起，采用动态柱吸附工艺同时进行脱蛋白和脱色，先流经聚酰胺柱，再流入D392树脂柱；按灵芝子实体残渣的投药量计，每处理1kg子实体残渣提取所得的澄清液最低需要配置已完成前处理的聚酰胺树脂250mL和D392阴离子树脂50mL，聚酰胺树脂柱装填高度为1～2米，D392阴离子树脂柱床高度20～40cm，用醋酸或柠檬酸预调澄清液pH值到4.5～6.5，温度保持20～35℃，澄清液上样吸附流速为总柱床的4～10BV/h，收集流出液；收集末端，继续用pH值4.5～6.5的水洗脱2BV，继续收集流出液，并合并流出液，以尽可能的置换出脱蛋白脱色液，降低目标多糖的工艺损耗；

(5)膜超滤工艺实现目标多糖的浓缩并去除小分子水溶性杂质：流出液用超滤膜进行浓缩，所述超滤膜的截留分子量为3500～5000D，操作工艺参数为温度25～45℃，操作压力0.2～0.5MPa，膜面流速2.5～4m/s，透过液通量4～20LMH，浓缩至30L时，加纯化水30L稀释，继续浓缩至30L，再重复一次稀释浓缩步骤，以最大限度的除尽小分子水溶性杂质，最后用15L纯化水冲洗超滤膜置换出全部浓缩液，以尽可能的降低工艺损耗；

(6)干燥工艺：浓缩液低速搅拌下缓慢加入原体积4～9倍量的酒精进行醇沉，静置过夜，抽去上清液，取出沉淀，食用酒精洗涤，热风干燥或真空干燥，最后粉碎过筛即得灵芝子实体精制多糖；或者，浓缩液直接采用喷雾干燥法一步完成干燥得到灵芝子实体精制多糖。