[发明专利]一种检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于新型纳米材料、免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器的制备方法及应用，具体涉及一种基于介孔核壳型金@钯@铂三元合金纳米微球的电化学免疫传感器的构建方法，以及由该方法构建的电化学免疫传感器在检测乙型肝炎表面抗原中的应用。

背景技术

乙型肝炎病毒感染是全球最严重的健康问题之一，乙型肝炎病毒携带者正在面临由这种持续性感染引发并发症的风险，例如引发慢性肝炎、肝硬化和肝癌。乙型肝炎病毒感染的潜伏期约为半年，因此，乙型肝炎病毒感染的早期诊断对降低其并发症发病率具有重要意义。乙型肝炎表面抗原是一种重要的乙型肝炎病毒标志物，它能够在潜伏期内乙型肝炎病毒携带者的血液中被检测出来，血液中乙型肝炎表面抗原的浓度为乙型肝炎病毒感染的早期诊断提供了重要依据。因此，发展高灵敏的乙型肝炎表面抗原的定量检测方法对乙型肝炎病毒感染的早期诊断尤为重要。

电化学免疫传感器是基于抗原和抗体特异性结合的一种分析方法，具有检测迅速、检出限低、灵敏度高、操作简单和制备成本低的优点。近年来，电化学免疫传感器备受关注，被广泛应用于病毒标志物或肿瘤标志物的检测中。本发明利用层层自组装技术，以金纳米棒为基底，以介孔核壳型金@钯@铂三元合金纳米微球作为乙型肝炎表面检测抗体的标记物，制备了一种检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器，实现了对乙型肝炎表面抗原的精确定量检测，具有检测范围广、检测下限低、灵敏度高、操作简单、检测速度快等优点，并且具有良好的重现性、稳定性和选择性，为乙型肝炎病毒感染的早期诊断提供了可靠的检测手段。

发明内容

本发明提供了一种检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器，所述电化学免疫传感器包括：工作电极、对电极和参比电极，所述工作电极的基底电极为玻碳电极，其表面依次修饰金纳米棒、乙型肝炎表面捕获抗体、牛血清蛋白、乙型肝炎表面抗原、介孔核壳型金@钯@铂三元合金纳米微球标记的乙型肝炎表面检测抗体。所述对电极为铂丝电极，所述参比电极为饱和甘汞电极。

本发明的目的之一是提供一种检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的一种检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器用于乙型肝炎表面抗原的检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

（1）制备金纳米棒分散液；

（2）制备介孔核壳型金@钯@铂三元合金纳米微球标记的乙型肝炎表面检测抗体分散液；

（3）制备检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器的工作电极；

（4）制作检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器的工作曲线。

其中，步骤（1）的制备金纳米棒分散液，包括以下步骤：

①制备金晶种分散液

取2.5 mL、0.2 mol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液和1.5 mL、1.0 mmol/L的氯金酸溶液置于50 mL圆底烧瓶中，在35.0 ℃水浴中强磁力搅拌30.0 min后，快速加入0.6 mL、0.01 mol/L的新配置的硼氢化钠溶液，停止磁力搅拌，在35.0 ℃水浴中静置3.0 h，得到金晶种分散液；

②制备金纳米棒分散液

取50.0 mL、0.2 mol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液，5.0 mL、15.0 mmol/L的氯金酸溶液，2.5 mL、4.0 mmol/L的硝酸银溶液和45.0 mL超纯水置于500 mL三口烧瓶中，摇匀后，置于35.0 ℃水浴中，缓慢加入1.25 mL、0.08 mol/L的抗坏血酸溶液，待混合液稳定后，将200.0 ~ 500.0 µL的金晶种分散液逐滴加入，在35.0 ℃水浴中静置24.0 h后，离心，用超纯水洗涤，将所得到的沉淀重新分散于20.0 mL 超纯水中，得到金纳米棒分散液。

步骤（2）的制备介孔核壳型金@钯@铂三元合金纳米微球标记的乙型肝炎表面检测抗体分散液，包括以下步骤：

①制备介孔核壳型金@钯@铂三元合金纳米微球