[发明专利]一种腺病毒的纯化方法在审
| 申请号： | 201710970157.0 | 申请日： | 2017-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN107488637A | 公开（公告）日： | 2017-12-19 |
| 发明（设计）人： | 王欣;刘冬;邓飞;贾芳苗;张仁怀 | 申请（专利权）人： | 成都远睿生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/02 | 分类号： | C12N7/02 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371 | 代理人： | 齐云 |
| 地址： | 610000 四川省成都*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 纯化 方法 | ||
1.一种腺病毒的纯化方法，其特征在于，其包括：
预处理步骤：
对收集的腺病毒细胞培养液第一次离心，收集细胞沉淀，用缓冲液冲重悬所述细胞沉淀，得到重悬液，冻融处理破碎所述重悬液中的细胞，将所述重悬液进行第二次离心，收集上清液；
密度梯度离心步骤：
将所述上清液加入至密度梯度介质溶液中，进行密度梯度离心，吸取完整病毒颗粒带溶液；
浓缩换液步骤：
将所述完整病毒颗粒带溶液进行浓缩、换液以及过滤，得到含有腺病毒的溶液。
2.根据权利要求1所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，所述密度梯度介质溶液中的密度梯度介质为氯化铯、甘油或蔗糖。
3.根据权利要求2所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，所述密度梯度介质溶液中的密度梯度介质为氯化铯，所述密度梯度介质溶液的密度梯度为1.2-1.4g/mL。
4.根据权利要求3任一项所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，密度梯度离心的转速为15000-22000g，时间为1.5-2.5h。
5.根据权利要求1-4任一项所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，第一次离心的转速为1800-2200rpm，时间为5-10min。
6.根据权利要求1-4任一项所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，第二次离心的转速为8000-12000rpm，时间为5-10min。
7.根据权利要求1-4任一项所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。
8.根据权利要求7所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为18-22mM。
9.根据权利要求1-4任一项所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，所述冻融处理为：将所述重悬液置于-80～-78℃冻存28-32min后取出，再置于36-38℃水浴。
10.根据权利要求2所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，所述冻融处理的次数为3-5次。
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