[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的底泥微生物

权利要求书

1.一种具有抗肿瘤活性的底泥微生物，其特征在于：所述的底泥微生物为：Cordyceps cylindrica SKL-1，从所述的微生物中提取抗肿瘤活性物质的方法包括：种子液培养、扩大发酵培养、提取活性物质，所述提取活性物质的步骤为：在扩大发酵培养得到的发酵液中加入等体积的乙酸乙酯灭活，将发酵液在1000-1500r/min转速下搅拌，抽滤2-3次滤除菌体后取滤液；在滤液中加入1.2-1.5倍体积的乙酸乙酯进行萃取，萃取3-4次，每次萃取以双频率复合超声波辅助，双频率复合超声波的频率分别为30-45kHz与65-80kHz、功率密度为0.45-0.60W/cm²,每次萃取后保留上层类黄色澄清液体即有机相，合并所有有机相液体经冷冻干燥后即得抗肿瘤活性物质。

2. 根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤活性的底泥微生物，其特征在于：所述的Cordyceps cylindrica SKL-1的种子液培养基的组成及其浓度为：马铃薯粉150-200g/L、葡萄糖20-25g/L、琼脂15-20g/L、氯化钠23.0-25.0g/L、硫酸镁2.8-3.0g/L、氯化钙2.0-2.3g/L、碘化钾1.2-1.5g/L、硼酸0.047-0.050g/L、硅酸钠0.0032-0.0035g/L、磷酸亚铁0.052-0.062g/L、3-硝基-2,6-二氯吡啶0.0011-0.0012g/L、氨水0.002-0.0025g/L、硝酸锂0.0031-0.0032g/L、余量为无菌蒸馏水；调节pH为7.5-8.0，在121-123℃温度下高压灭菌20-30分钟。

3. 根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤活性的底泥微生物，其特征在于：所述的Cordyceps cylindrica SKL-1的发酵培养基的组成及其浓度为：可溶性淀粉10-12g/L，蛋白胨1-1.5g/L，抑制剂0.01-0.013g/L，海水素33-35g/L，余量为无菌蒸馏水；调节pH为7.5-8.0，在121-123℃温度下高压灭菌20-30分钟。

4.根据权利要求3所述的一种具有抗肿瘤活性的底泥微生物，其特征在于：所述的抑制剂是重量比为0.35-0.37:1的L-（-）-甘油醛与D-（+）-甘油醛。

5. 根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤活性的底泥微生物，其特征在于：所述的种子液培养步骤为：无菌条件下，将Cordyceps cylindrica SKL-1真菌接种入消过毒的安剖瓶中，用无菌细管吸取3-4mL培养液置于安剖瓶中，使冻干菌体溶解成悬浮状；将活化后的Cordyceps cylindrica KL-1真菌接种入斜面培养基中，在32-35℃条件恒温下培养48-96小时，加入培养基等量的无菌蒸馏水即得种子液。

6.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤活性的底泥微生物，其特征在于：所述的扩大发酵培养步骤为：在发酵培养液中接种入3-5%的种子液，将发酵培养液放置在气浴恒温振荡器中进行摇床发酵扩大培养，摇床转速为170-190r/min，发酵培养36-72小时。

7.根据权利要求6所述的一种具有抗肿瘤活性的底泥微生物，其特征在于：所述的扩大发酵培养步骤中的发酵温度为26-29℃。