[发明专利]一种小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的HPLC定性方法

说明书

本发明公开了一种小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的HPLC定性方法，小麦经提取，免疫亲和柱净化，得待测液；采用HPLC方法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇的标准样和所述的待测液；通过DAD检测器对标准样的DON峰和待测液的DON目标峰进行紫外扫描，比对紫外扫描的光谱图，用于定性判断待测液中的目标峰；HPLC的检测条件为：色谱柱为C18反相柱；流动性为24～26v％的甲醇水溶液；检测波长为235～241nm。标准样的DON峰和待测液的DON目标峰比对的匹配度高于95％以上，待测液的DON目标峰为脱氧雪腐镰刀菌烯醇的色谱峰。本发明定性方法检测限低，结果判断准确，且相对于现有的HPLC‑MSMS定性方法，成本低廉，操作简单，容易推广。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种小麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的定性方法。

背景技术

小麦是全球种植面积最大、总产量最高、也是最为重要的粮食作物，超过1/3的世界人口以小麦制品为主食。在中国，小麦仅次于第一大粮食作物水稻，总产量1.2亿吨左右，是中国半数以上人口的主粮^[1]。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol)，简写“DON”，又称呕吐毒素，属于单端孢霉烯族化合物，主要是由禾谷镰刀菌、黄色镰刀菌、雪腐镰刀菌等真菌产生的次级有毒代谢物^[2～3]，是小麦等谷物中最为普遍发生的镰刀菌毒素^[4]，DON的污染程度与降水、花期湿度和储藏条件密切相关^[5]，世界各地均有关于该毒素的污染报道^[6～9]，是世界上分布最广、污染最严重的霉菌毒素之一^[10～14]。DON可以干扰核糖体肽基转移酶的活性，阻碍核糖体循环，抑制蛋白质的合成，导致头疼、头晕、呕吐、中枢神经系统紊乱、免疫功能障碍和繁殖功能障碍等症状^[15～17]。

DON的污染对于小麦粉的储藏和食用安全的危害非常大，因此建立准确有效的DON检测方法尤为重要。液相色谱是目前检测小麦及其制品中DON最普遍使用的方法，2017年更新的GB 5009.111-2016《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》中的免疫亲和高效液相色谱法的色谱条件对于检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测存在出现假阳性的风险，而第一法同位素液相色谱串联质谱法，虽然干扰小但是检测成本高，仪器价格昂贵。关于液相色谱检测DON的方法研究文献还有很多，如罗颖鹏，陈正行等^[18]建立了固相萃取-高效液相色谱对小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇进行测定方法，研究优化了提取剂、净化方法、流动相组成及流速等条件，其优化后的色谱条件为流动相乙腈-水(6∶95，V/V)，流速0.9mL/min，检测波长218nm，DON检测结果良好，回收率达到90.12％～106.25％；陆源，王韦岗^[19]等建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱法检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的分析方法，主要研究的是通过优化前处理方法，消除标准品中乙酸乙酯引起的溶剂效应，其测试的色谱条件为流动相甲醇-水(20∶80，V/V)，流速0.9mL/min，检测波长218nm；吴振兴，鲍蕾等^[22]建立小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的免疫亲和净化-高效液相色谱检测方法，对色谱条件、提取液和净化柱的选择进行了优化研究，其优化后的色谱条件为流动相：10％乙腈水，流速：0.9mL/min，检测波长218nm；张羽，唐亚芳^[21]等主要研究了免疫亲和层析净化高效液相色谱法与酶联免疫吸附法的方法比较，其液相色谱条件为流动相甲醇-水(20∶80，V/V)，流速0.7mL/min，检测波长218nm，结果表明两种方法无显著性差异；金海涛，张晓^[22]波等建立了快速检测小麦中DON、ZON、T-2的高效液相色谱质谱方法，该方法能够一次快速检测小麦粉中3种毒素，具有速度快、准确度高的特点，其中三重四级杆的多反应监测方式采集离子对，本身就具有辅助定性的功能，达到了定量检测DON的同时定性的目的。现有以及行业标准的DON液相色谱法，均设置218nm来检测样品；且HPLC洗脱效果不理想，DON峰分离效果不佳，目标峰容易受杂质峰干扰，样品检测准确性不理想。