[发明专利]一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法

权利要求书

1.一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.取不含胚芽的半粒甜瓜种子，并剪碎于2.0ml离心管中，加入直径为5.0mm的不锈钢球，将离心管放置于组织研磨器中进行研磨，设置研磨时间180～300s，研磨结束后，加入800μL 2～5％CTAB提取缓冲液，将离心管于65～70℃水浴30～40min，水浴过程中不断温和翻转离心管，使其充分混匀；

b.加入等体积的苯酚-氯仿-异戊醇混合液，混匀，离心；所述苯酚-氯仿-异戊醇混合液中各组份的体积比为25:24:1；

c.吸上清，上清中加入2～5μL Rnase A孵育；孵育条件为37℃、30mim；

d.加入等体积的氯仿-异戊醇溶液，混匀，离心；氯仿-异戊醇混合液中各组份的体积比为24:1；

e.吸上清，装入一新的离心管，加入0.7倍体积的-20℃预冷的异丙醇，混匀，于-20～-30℃放置30～60min，离心，弃上清；

f.加800μL 75％乙醇反复颠倒清洗，离心，弃上清，吹干；

g.加入30～50μL TE缓冲液溶解DNA，保存。

2.根据权利要求1所述的一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，步骤b中所述离心的参数为10000～12000rpm，离心时间为10～15min。

3.根据权利要求1所述的一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，离心的参数为10000～12000rpm，离心时间为10～15min。

4.根据权利要求1所述的一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤e为：吸上清，装入一新的离心管，加入0.7倍体积的-20℃预冷的异丙醇，然后轻轻颠倒混匀，于-20℃冰箱中放置30min，4℃、12000rpm条件下离心10～15min，弃全部液体。

5.根据权利要求1所述的一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤f为：加800μL 75％乙醇反复颠倒清洗，4℃、12000rpm条件下离心3～5min，倒弃全部液体，此步重复操作2～3次，置于超净台上吹干。

6.根据权利要求1所述的一种不含胚芽的甜瓜种子全基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤g中TE缓冲液的加入量为30～50μL，保存条件为-20～-30℃。