[发明专利]人羊膜上皮细胞分泌因子在制备修复卵巢功能的药物中的应用

说明书

本发明涉及人羊膜上皮细胞分泌因子在制备修复卵巢功能的药物中的应用。本发明将人羊膜上皮细胞分泌因子经浓缩后通过腹腔注射注入化疗损伤小鼠体内，发现可明显增加损伤卵巢中的卵泡数量、促进卵泡发育相关基因表达并促进血管新生，表明人羊膜上皮细胞不仅可直接转分化为颗粒细胞参与修复卵巢功能的过程，同时其旁分泌途径在此过程中也发挥着重要作用，人羊膜上皮细胞分泌因子可用于制备修复卵巢功能的药物。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及人羊膜上皮细胞分泌因子在制备修复卵巢功能的药物中的应用。

背景技术

人羊膜上皮细胞(human Amniotic Epithelial Cells，hAECs)来自于分娩后的“医疗废弃物”胎盘，具有来源丰富、容易获得、无创伤性、不易引起伦理及法律争议并具有低免疫源性等特点。因其独特的生物学特性，为损伤组织的功能修复及再生医学的发展开辟了新的研究途径。越来越多的研究显示，人羊膜上皮细胞的移植治疗对多种组织损伤及疾病模型具有良好的治疗修复作用。

《苏州大学》，2013，29(5)，刊出的论文“人羊膜上皮细胞移植治疗创伤性脊髓损伤的移植免疫研究”，对人羊膜上皮细胞与研究较多的骨髓间充质干细胞移植后移植免疫情况作对比，揭示了人羊膜上皮细胞移植治疗创伤性脊髓损伤在移植免疫方面的优势，具体地，用SD大鼠建立了创伤性脊髓损伤动物模型，将人羊膜上皮细胞植入各分组大鼠的横断部位，对大鼠后肢运动功能恢复情况进行评分和记录，利用免疫组织化学法观察损伤段脊髓，用ELISA法测定大鼠血清IL-2和IL-10OD值，观察二者变化，结果表明细胞移植治疗脊髓损伤效果明显，人羊膜上皮细胞较大鼠骨髓间充质细胞的免疫源性为弱，人羊膜上皮细胞作为一种特殊的“干细胞”用于治疗脊髓损伤具有显著优势。专利文献CN104666346A，公开日2015.06.03，公开了一种羊膜上皮细胞在制备治疗不孕不育症药物中的用途。在实施例中，将人羊膜上皮细胞移植入化疗药物诱导的卵巢早衰(Premature Ovarian Failure andInsufficiency，POF/POI)小鼠体内，通过卵巢功能学、组织形态学及分子生物学相结合的方法，研究其在化疗药物引起卵巢功能损伤后的修复作用，首次报道分别通过尾静脉注射、腹腔注射两种方式将hAECs移植入POF/POI小鼠体内后，能有效抑制化疗药物引起的卵巢功能损伤，主要表现为：抑制化疗药物诱导的颗粒细胞凋亡，明显增加成熟卵泡数量并改善小鼠的生育能力。又通过使用携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)标记的慢病毒对植入的hAECs进行示踪观察，发现在化疗药物诱导的POF/POI小鼠体内，部分植入的hAECs迁移至损伤卵巢并转分化为颗粒细胞参与卵泡发育。通过以上实验证实了人羊膜上皮细胞能够有效治疗或者改善由于卵巢功能衰退所导致的不孕不育症，显著提高了卵巢功能衰退导致的不孕不育症患者体内卵泡的生成。

然而，目前还未见使用人羊膜上皮细胞分泌因子制备修复卵巢功能的药物的相关报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种人羊膜上皮细胞分泌因子的用途。

本发明的另一的目的是，提供一种人羊膜上皮细胞分泌因子。

本发明的再一的目的是，提供一种人羊膜上皮细胞分泌因子的制备方法。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

第一方面是人羊膜上皮细胞分泌因子在制备修复卵巢功能的药物中的应用。

优选地，所述的人羊膜上皮细胞分泌因子是通过以下方法制备的：

a)将足月健康产妇新鲜的羊膜组织经0.25％胰酶消化1-2min分离出人羊膜上皮细胞，重悬于含有胎牛血清的DMEM/F12培养基中，接种于细胞培养皿中后置于含有5％CO₂的37℃细胞培养箱中进行培养；