[发明专利]人羊膜上皮细胞分泌因子在制备修复卵巢功能的药物中的应用在审
| 申请号： | 201710862854.4 | 申请日： | 2017-09-22 |
| 公开（公告）号： | CN109528772A | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 赖东梅;张秋婉;郭英;孙俊艳;卜时夏;王茜 | 申请（专利权）人： | 中国福利会国际和平妇幼保健院 |
| 主分类号： | A61K35/50 | 分类号： | A61K35/50;A61P15/08;C12N5/073;C12P21/00 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 巫蓓丽 |
| 地址： | 200030 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人羊膜上皮细胞 分泌 卵巢功能 制备 修复 卵巢 腹腔注射 化疗损伤 颗粒细胞 卵泡发育 相关基因 血管新生 可用 卵泡 小鼠 应用 损伤 体内 分化 浓缩 发现 | ||
1.人羊膜上皮细胞分泌因子在制备修复卵巢功能的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的人羊膜上皮细胞分泌因子是通过以下方法制备的：
a)将足月健康产妇新鲜的羊膜组织经0.25％胰酶消化1-2min分离出人羊膜上皮细胞，重悬于含有胎牛血清的DMEM/F12培养基中，接种于细胞培养皿中后置于含有5％CO2的37℃细胞培养箱中进行培养；
b)当细胞融合度达到70％-80％时，使用0.25％胰酶消化贴壁细胞2-3min并重悬于含有胎牛血清的DMEM/F12培养基中，重新调整细胞密度为1×105后接种于细胞培养皿中，放置于含有5％CO2的37℃细胞培养箱中进行培养；
c)待细胞密度再次达到70％-80％时，吸出含血清的完全培养基，用PBS缓慢洗涤2-3次后更换无血清的DMEM/F12培养基培养；
d)14-18小时后，缓慢地将培养基吸出，在1500-2500g条件下离心20-40min，使用0.2μm的滤器将获得的培养基进行再次过滤即可获得人羊膜上皮细胞分泌因子。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的人羊膜上皮细胞分泌因子是通过以下方法制备的：
a)将足月健康产妇新鲜的羊膜组织经0.25％胰酶消化1.5min分离出人羊膜上皮细胞，重悬于含有胎牛血清的DMEM/F12培养基中，接种于细胞培养皿中后置于含有5％CO2的37℃细胞培养箱中进行培养；
b)当细胞融合度达到70％-80％时，使用0.25％胰酶消化贴壁细胞2.5min并重悬于含有胎牛血清的DMEM/F12培养基中，重新调整细胞密度为1×105后接种于细胞培养皿中，放置于含有5％CO2的37℃细胞培养箱中进行培养；
c)待细胞密度再次达到70％-80％时，吸出含血清的完全培养基，用PBS缓慢洗涤2次后更换无血清的DMEM/F12培养基培养；
d)15小时后，缓慢地将培养基吸出，在2000g条件下离心30min，使用0.2μm的滤器将获得的培养基进行再次过滤即可获得人羊膜上皮细胞分泌因子。
4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于，所述的修复卵巢功能是指修复化疗损伤卵巢的功能。
5.人羊膜上皮细胞分泌因子在制备治疗不孕不育症的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的人羊膜上皮细胞分泌因子是通过以下方法制备的：
a)将足月健康产妇新鲜的羊膜组织经0.25％胰酶消化1-2min分离出人羊膜上皮细胞，重悬于含有胎牛血清的DMEM/F12培养基中，接种于细胞培养皿中后置于含有5％CO2的37℃细胞培养箱中进行培养；
b)当细胞融合度达到70％-80％时，使用0.25％胰酶消化贴壁细胞2-3min并重悬于含有胎牛血清的DMEM/F12培养基中，重新调整细胞密度为1×105后接种于细胞培养皿中，放置于含有5％CO2的37℃细胞培养箱中进行培养；
c)待细胞密度再次达到70％-80％时，吸出含血清的完全培养基，用PBS缓慢洗涤2-3次后更换无血清的DMEM/F12培养基培养；
d)14-18小时后，缓慢地将培养基吸出，在1500-2500g条件下离心20-40min，使用0.2μm的滤器将获得的培养基进行再次过滤即可获得人羊膜上皮细胞分泌因子。
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