[发明专利]一种检测结合珠蛋白分型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，更具体地，涉及一种检测结合珠蛋白分型的方法。

背景技术

目前糖尿病患者人群日益增大，也逐渐趋于年轻化，这些患者有很高的并发心血管疾病的风险，粗略统计约有75％的糖尿病患者死于心血管疾病。为了减轻患者高糖血症的症状，减少微血管和大血管并发症的发生，使患者能够过上正常的生活，采用合适的药物预防心血管并发症尤为重要。由于糖尿病患者并发心血管疾病与体内氧化应激有一定的相关性，因此美国心脏病学会以及国际卫生组织(WHO)均推荐使用维生素E等抗氧化剂来预防糖尿病患者心血管并发症。

临床发现，不同的糖尿病患者对于维生素E补充所带来的效果差异非常大。有的患者补充维生素E可以明显降低心血管疾病风险；而有些患者却相反，补充维生素E后反而会增加并发心血管疾病的风险，严重时甚至会导致死亡事件。

大量科学研究发现，结合珠蛋白的基因型与糖尿病患者并发心脏病的风险密切相关。其中，携带Hp2-2基因型的糖尿病患者罹患心脏病并发症、中风甚至死亡的风险更高，约为携带Hp1-1基因型的糖尿病患者的5倍；而携带Hp2-1基因型的糖尿病患者的心脏病并发风险介于两者之间。而从补充维生素E后的治疗效果看，对于携带有结合珠蛋白Hp2-2基因型的糖尿病患者，经过18个月维生素E治疗后，心脏病和中风发作的几率比未服用维生素E的同类患者少50％，且未出现副作用。而对Hp2-1或Hp1-1基因型的糖尿病患者，补充维生素E则会反而提高其并发心血管疾病的风险。

结合珠蛋白(Haptoglobin，Hp)又称触珠蛋白，是血清α2-球蛋白组分中的一种糖蛋白类，是一种能稳定红血球血红蛋白的抗氧化蛋白，可以保护血管壁避免发生炎症。人类结合珠蛋白的基因位于染色体16q22.1，人群中常见的Hp有三种基因型，分别是Hp1-1，Hp2-1和Hp2-2，受控于Hp座位上的一对等位基因Hp1和Hp2，呈共显性遗传。不同地区和人种的Hp1和HP2基因频率各不相同，西方人群的统计数据显示，Hp1-1基因型的概率为16％，Hp2-2基因型的概率为36％，而Hp2-1基因型的概率则为48％。亚洲人以Hp2-2居多，其次为Hp2－1，而Hp1－1最少，我国汉族人种Hp1基因型频率较低，多以Hp2为主。

综上所述，携带有结合珠蛋白Hp2-2基因型的糖尿病患者并发心血管疾病甚至死亡风险更高，服用维生素E可以降低其风险；携带Hp2-1或Hp1-1基因型的糖尿病患者虽然并发心血管疾病风险较低，但服用维生素E后其并发风险反而会提高。因此，为了更好地分析判断糖尿病患者心血管疾病的并发风险，合理地进行早期干预，并在临床上给予更可靠准确的用药指导，针对糖尿病患者人群进行结合珠蛋白的基因分型非常必要。

目前检测结合珠蛋白分型的方法多是电泳法，电泳前先使待测样品与血红蛋白形成Hp－Hb(结合珠蛋白-血红蛋白)复合物。电泳完后可以利用血红蛋白的过氧化物酶活性在过氧化氢存在时使联苯胺氧化成联苯胺蓝，染色普通型可采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分型。Hp亚型则需先纯化样品中的Hp，再使Hp组分中的α肽链变性，还原后方能采用普通电泳或等电聚焦技术进行分型，操作过于复杂。因Hp在血痕中可以保存相当长的时间，在实践中可通过检测血痕中的Hp进行分型鉴定，但由于血痕中过多的血红蛋白可掩盖Hp泳谱，因而在一定程度上限制了血痕的个体识别能力。

故有待提供一种操作简便快速、准确，又可应用于临床实践的检测结合珠蛋白分型的方法。

发明内容

本发明提供了一种检测结合珠蛋白分型的方法，以至少解决现有技术中检测结合珠蛋白分型方法复杂、准确率低的技术问题。

本发明提供了一种检测结合珠蛋白分型的方法，上述方法通过设计特定引物，对包含上述结合珠蛋白基因的待测样本进行基因扩增得扩增产物，通过对上述扩增产物进行电泳检测即可确定上述待测样本的上述结合珠蛋白的基因型,上述特定引物为：

正向引物(F):5’-GAGGGGAGCTTGCCTTTCCATTG-3’；

反向引物(R):5’-ACCAGCCAGGGCTCAAAAATCTC-3’。

可选的，上述基因扩增，即聚合酶链反应(PCR)使用的缓冲液的混合溶液的成分包括：

三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)，终浓度为15mmol/L-40mmol/L，

pH为8.3-8.9；

乙酸钾，终浓度为50mmol/L-100mmol/L；

乙酸镁，终浓度为1mmol/L-2mmol/L；