[发明专利]一种用于检测结合珠蛋白分型的方法

权利要求书

1.一种用于检测结合珠蛋白分型的非诊断目的的方法，其特征在于：所述方法通过设计特定引物，对包含所述结合珠蛋白基因的待测样本进行基因扩增得扩增产物，通过对所述扩增产物进行电泳检测即可确定所述待测样本的所述结合珠蛋白的基因型,所述特定引物为：

正向(F):5’-ATAATACAGTTCGCGAGCTTCT-3’；

反向(R):5’-GGGCAAGATACTCAACCTGTC-3’；

所述基因扩增，即聚合酶链反应(PCR)使用的缓冲液的混合溶液的成分包括：

三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)，终浓度为8mmol/L-12mmol/L，pH为8.0-8.7；

氯化钾(KCl)，终浓度为40mmol/L-60mmol/L；

氯化镁(MgCl₂)，终浓度为：1mmol/L-2mmol/L；

Taq酶，终浓度为0.5U-2.5U；

脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)，终浓度为100umol/L-250umol/L；

所述基因扩增，即聚合酶链反应(PCR)包括如下步骤：在90℃至100℃的温度下预变性3-5分钟；在90℃至100℃的温度下变性30秒至50秒，在55℃至65℃的温度下退火20秒至40秒，在70℃至74℃的温度下延伸40秒至90秒，其中所述变性步骤、所述退火步骤以及所述延伸步骤为25至40个循环；然后在70℃至74℃的温度下终延伸3至10分钟；最后保持温度为3℃至10℃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因扩增，即聚合酶链反应(PCR)使用的缓冲液的混合溶液的成分包括：

三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)，终浓度为10mmol/L，pH为8.3；

氯化钾(KCl)，终浓度为50mmol/L；

氯化镁(MgCl₂)，终浓度为：1.5mmol/L；

Taq酶，终浓度为2U；

脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)，终浓度为200umol/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因扩增，即聚合酶链反应(PCR)使用的缓冲液的混合溶液的成分包括：

三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)，终浓度为8mmol/L，pH为8.0；

氯化钾(KCl)，终浓度为60mmol/L；

氯化镁(MgCl₂)，终浓度为：1.0mmol/L；

Taq酶，终浓度为2.5U；

脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)，终浓度为110umol/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因扩增，即聚合酶链反应(PCR)使用的缓冲液的混合溶液的成分包括：

三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)，终浓度为12mmol/L，pH为8.6；

氯化钾(KCl)，终浓度为40mmol/L；

氯化镁(MgCl₂)，终浓度为：1.8mmol/L；

Taq酶，终浓度为0.8U；

脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)，终浓度为250umol/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因扩增，即聚合酶链反应(PCR)包括如下步骤：在95℃的温度下预变性4分钟；在95℃的温度下变性40秒，在60℃的温度下退火30秒，在72℃的温度下延伸80秒，其中所述变性步骤、所述退火步骤以及所述延伸步骤为30个循环；然后在72℃的温度下终延伸3分钟；最后保持温度为4℃。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因扩增，即聚合酶链反应(PCR)包括如下步骤：在98℃的温度下预变性5分钟；在98℃的温度下变性35秒，在63℃的温度下退火22秒，在70℃的温度下延伸60秒，其中所述变性步骤、所述退火步骤以及所述延伸步骤为38个循环；然后在70℃的温度下终延伸8分钟；最后保持温度为3℃。