[发明专利]一种利用诊断标志物评价微量外源化学物早期毒性的方法及其应用

权利要求书

1.一种利用诊断标志物评价微量外源化学物早期毒性的方法，其特征在于，检测诊断标志物包括：L-缬氨酸、N-乙酰-L-天门冬氨酸、溶血卵磷脂、肌酐和2-磷酸甘油酸；

相对于正常样品，所述诊断标志物出现以下变化：DM(L-缬氨酸)≤0.9、DM(N-乙酰-L-天门冬氨酸)≤0.9、DM(溶血卵磷脂)≤0.6；DM(肌酐)≥1.5、DM(2-磷酸甘油酸)≥2，则判定为外源化学物引起发育毒性，其中，DM值为某一诊断标志物在待测样品中含量与正常样品中含量的比值；

其中所述溶血卵磷脂为[M+H]⁺m/z为570的溶血卵磷脂；

所述外源化合物为重金属、农药。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重金属包括镉、铅、铜、汞、锡。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述农药包括阿特拉津、西玛津、乐果。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，斑马鱼受精后2-8h的胚胎作为处理对象，处理90-120h后，提取仔鱼的代谢物即为检测所述标志物的对象。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述处理为将所述胚胎暴露在含有低浓度的外源化学物的溶液中。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述处理的过程中，温度保持在28-29℃。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，提取仔鱼的代谢物的步骤具体为：收集仔鱼，纯水清洗，吸干水分；

加入低温的体积百分数为80％±2％的甲醇水溶液，低温破碎；

低温放置30±5min，低温离心，取上清液，吹干，加体积百分数为50％±1％的甲醇水溶液复溶样品，即得。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述标志物检测采用超高效液相色谱仪-四级杆飞行时间串联质谱仪进行；

色谱检测条件：超高效液相色谱系统，色谱柱为C18柱，进样量2～8μL，柱温30～50℃，流动相为溶液A-溶液B，梯度洗脱程序为0～1min，2％溶液B；1～11min，2％～50％溶液B；11～17min，50％～98％溶液B；17～18min，98％溶液B；18～18.5min，98％～2％溶液B；18.5～21min，2％溶液B；

溶液A为体积浓度0.1％±0.02％的甲酸水溶液，溶液B为体积浓度0.1％±0.02％的甲酸乙腈；

质谱检测条件：Thermo LTQ Orbitrap XL，ESI电喷雾离子源，正负离子模式，正离子喷雾电压4.80kV，负离子喷雾电压4.50kV；鞘气及辅助气为氮气，鞘气流速40±2arb，辅助气流速15±1arb，毛细管温度325±5℃，电压35V/－15V，管透镜电压50V/-50V，分辨率60000进行全扫描，扫描范围50～1000m/z，二级质谱碰撞能量ESI⁺45eV/ESI^－35eV。

9.权利要求1-8任一项所述的方法在环境或临床医学标准化检测中的应用。