[发明专利]一种去棕榈酰化PD-L1蛋白质及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种去棕榈酰化PD-L1蛋白质，其特征在于，所述PD-L1蛋白质氨基酸序列中在272位点氨基酸的半胱氨酸替换为丙氨酸，得到所述去棕榈酰化PD-L1蛋白质；所述去棕榈酰化PD-L1蛋白质的氨基酸序列为SEQ ID NO:1，编码权利所述去棕榈酰化PD-L1蛋白质的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。

2.一种如权利要求1所述的去棕榈酰化PD-L1蛋白质的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、分析检测PD-L1蛋白质存在的棕榈酰化位点,所述PD-L1蛋白质的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示；

步骤2、根据步骤1得到的位点构建突变体氨基酸序列，进一步得到PD-L1蛋白质突变体的核苷酸序列；

步骤3、将编码突变体PD-L1的核苷酸序列片段连入真核生物表达载体中，构建成表达重组质粒；

步骤4、通过步骤3得到的表达重组质粒进行表达得到去棕榈酰化PD-L1蛋白质。

3.据权利要求2所述方法，其特征在于，还包括以下步骤：

步骤1、使用CSS-palm 算法分析PD-L1氨基酸序列，对PD-L1蛋白质进行胰酶切割、串联质谱分析检测PD-L1蛋白质存在的棕榈酰化位点， PD-L1蛋白质存在棕榈酰化的位点为Cys272；

步骤2、对步骤1得到的棕榈酰化的272位点的氨基酸替换为其他氨基酸得到PD-L1蛋白质272位点突变体氨基酸序列；

根据PD-L1蛋白质272位点突变体氨基酸序列，选用真核生物偏好密码子，合成编码PD-L1蛋白质272位点突变体的核苷酸序列；

步骤3、将编码突变体PD-L1的核苷酸序列片段连入真核生物表达载体中，构建成表达重组质粒；

步骤4、通过步骤3得到的表达重组质粒转染哺乳动物细胞，构建稳定细胞株进行表达得到去棕榈酰化PD-L1蛋白质。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述步骤2中，所述PD-L1蛋白质272位点突变体氨基酸序列为SEQ ID NO:1；所述编码PD-L1蛋白质272位点突变体的核苷酸序列为SEQID NO:2；编码PD-L1蛋白质突变体的核苷酸序列的获得方法为以野生型PD-L1为模板通过定点突变的方法。

5.如权利要求1所述的去棕榈酰化PD-L1蛋白质用于制备验证PD-L1蛋白质

的棕榈酰化的试剂或试剂盒的应用。

6.如权利要求1所述的去棕榈酰化PD-L1的核苷酸序列片段的表达重组质粒用于制备抑制细胞中的PD-L1的试剂或试剂盒的应用。