[发明专利]蜂乳蛋白活性多肽的制备方法

权利要求书

1.蜂乳蛋白活性多肽的制备方法，包括浸提、分步酶解、纳滤、凝胶层析和高效液相色谱纯化，其特征在于：所述的分步酶解步骤为将蜂乳蛋白溶液置于25~40℃的恒温环境中，加入胰蛋白酶酶解，酶解结束后灭酶，加入枯草芽孢杆菌中性蛋白酶和活性短肽酶解，酶解结束后灭酶，过滤取滤液。

2.根据权利要求1所述的蜂乳蛋白活性多肽的制备方法，其特征在于：所述的胰蛋白酶的加入量为蜂乳蛋白溶液质量的0.2~0.7%，酶解pH为7.5~9.0，酶解温度为25~40℃，酶解时间为2~4h；枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的加入量为蜂乳蛋白溶液质量的0.1~0.5%，活性短肽的加入量为枯草芽孢杆菌中性蛋白酶质量的1~5%，酶解pH为7.0~7.8，酶解温度为35~50℃，酶解时间为10~30min。

3.根据权利要求1所述的蜂乳蛋白活性多肽的制备方法，其特征在于：所述的活性短肽的氨基酸序列为SCASRSCKCFRC。

4.根据权利要求1所述的蜂乳蛋白活性多肽的制备方法，其特征在于：所述的浸提步骤为在蜂乳脱脂粉末中按料液比1:10~1:25加入0.5~2.0%NaCl溶液，调节pH为7.0~9.0，0~8℃下浸提2~5h，在0~8℃下离心取上清液，所述上清液即为蜂乳蛋白溶液。

5.根据权利要求1所述的蜂乳蛋白活性多肽的制备方法，其特征在于：所述的纳滤步骤为将分步酶解得到的滤液置于蒸馏水中浓缩纳滤24~36h。

6.根据权利要求1所述的蜂乳蛋白活性多肽的制备方法，其特征在于：所述的凝胶层析步骤为用蒸馏水将Sephadex G-15凝胶溶胀后装柱，检查柱均匀性后上样，用自动取样器收集洗脱液，在280nm下测紫外吸光度，做曲线；重复上样，根据吸光度曲线收集分离的溶液；上样溶液为纳滤浓缩液用蒸馏水稀释10~20倍得到。

7.根据权利要求1所述的蜂乳蛋白活性多肽的制备方法，其特征在于：所述的高效液相色谱分离纯化条件为：色谱柱：反相C18键合硅胶柱；流动相：0~4min，水；4~16min，60~80%水，20~40%乙腈；16~35min，乙腈；流速：0.7~1.3ml/min，柱温25~35℃，检测波长为254 nm和280 nm，收集主要色谱峰，冻干得到蜂乳蛋白活性多肽。