[发明专利]王不留行黄酮苷在制备抗血管钙化药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗血管钙化中药开发，具体设计王不留行黄酮苷在制备抗血管钙化药物中的应用，属中药药物开发领域。

背景技术

血管钙化是一种常见的血管病变，与骨发育过程相似，其病理表现主要为血管壁的钙磷过度沉积，导致血管壁僵硬性增加和血管顺应性下降，进而引起心肌缺血缺氧，左心室肥大和心力衰竭，引发血栓形成和板块破裂，血管钙化是心脑血管疾病高死亡率的主要因素。血管钙化受到包括代谢、炎症、氧化应激、凋亡等多种因素的调控，血管钙化是动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、慢性肾病、衰老和血管损伤等心血管疾病的共同病理表现。临床研究发现80％的血管损伤和90％的冠脉疾病中均存在血管钙化，血管钙化是心血管事件和脑卒中的预警指标，但血管钙化的发病机制目前尚未完全阐明，有效预防和治疗血管钙化是将成为21世纪医疗卫生事业的主要挑战。

中药是我国的宝贵资源之一，研究发现传统一些中药在防护血管钙化中发挥一定的作用，但深入探索和筛选具有抗血管钙化的中药仍然是任重道远的巨大任务，阐明中药开血管钙化其作用机制并研究和开发这些中药具有重要的临床意义。我们多年来一直从事王不留行的研究，王不留行为石竹科植物麦蓝菜Vaccaria Segetalis(Neck.)Garcke的干燥成熟种子，是一种常见的中药，具有活血通经、下乳消肿等功效。王不留行主要含有刺桐碱、三萜皂苷、黄酮苷、类脂、环肽、脂肪酸和单糖等成分，王不留行黄酮苷(Vaccarin,VAC)是王不留行的主要有效成分，本实验室研究发现不留行黄酮苷具有促进血管新生，对抗高糖和氧化应激的引起的内皮细胞损伤，降低血压和保护高血压肾病，改善糖尿病脂质代谢紊乱，加快开放性创伤的愈合速度，提示王不留行黄酮苷可能具有心血管保护作用，但目前尚未有报道王不留行黄酮苷在制备抗血管钙化药物中的作用。

发明内容

本发明要解决的是为现有的抗血管钙化药物制备技术领域提供一种新的途径，提供王不留行黄酮苷在抗血管钙化药物中的作用，因此本研究提供的技术方法是将王不留行黄酮苷应用于制备治疗血管钙化的药物。

本发明的有益效果是：王不留行黄酮苷改善血管钙化，将王不留行黄酮苷应用到血管钙化相关药物的开发中，以制备更好的抗血管钙化的新思路，不仅拓展了抗血管钙化药物的选择，也为我国抗血管钙化中药的筛选提供的新的策略和思路。

附图说明

图1：王不留行黄酮苷(VAC)对血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。

图2：王不留行黄酮苷(VAC)对血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化相关蛋白Runx-2和BMP-2的影响。

图3：王不留行黄酮苷(VAC)对血管钙化大鼠模型血管钙离子沉积和ALP活性的影响。

图4：王不留行黄酮苷(VAC)对血管钙化大鼠模型的血管钙化相关关蛋白Runx-2和BMP-2的影响。

具体实施方式

实施例1血管钙化模型的复制

血管钙化模型大鼠制作方法：参考国内外权威期刊，我们采用8周龄雄性SD大鼠肌肉注射维生素D330万单位/kg，同时灌胃尼古丁25mg/kg，9h后再重复给予尼古丁1次，2周后再次给予肌肉注射维生素DB 30万单位/kg，4周后大鼠出现广泛的血管钙化。

实施例2实验分组及王不留行黄酮苷(VAC)干预

将8周龄的SD大鼠随机分三组：

(1)正常对照-生理盐水组：为正常对照组，始终给予正常饮食和饮水，2周后给予生理盐水皮下灌注2周作为王不留行黄酮苷(VAC)的对照；

(2)血管钙化组-生理盐水组采用维生素D3联合尼古丁方法引起血管钙化，2周后给予生理盐水(saline)腹腔注射2周作为王不留行黄酮苷(VAC)的对照；

(3)血管钙化-黄酮苷组(10mg/kg)：采用维生素D3联合尼古丁方法引起血管钙化，2周后给予王不留行黄酮苷(VAC，10mg/kg)腹腔注射2周。

实施例3 von Kossa染色和Alizarin red S染色

参考国内外权威文献，戊巴比妥钠麻醉大鼠，打开胸腔、暴露心脏，经左心室插管至升主动脉，夹壁腹主动脉，左心耳剪开一小出口，快速灌注0.01M PBS(37℃)冲洗至流出液清亮后再灌注预冷(4℃)的4％多聚甲醛固定(先快后慢，在大鼠肢体伸展后减慢速度)。取出胸主动脉，置于4℃的4％多聚甲醛后固定24h，脱水，石蜡包埋，切片，进行常规von Kossa染色和Alizarin red S染色。

实施例4原代血管平滑肌细胞培养及钙化培养基诱导