[发明专利]一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测啶虫脒的方法，特别是一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法。

背景技术

啶虫脒是一种新型杀虫剂，具有触杀、胃毒和较强的渗透作用，杀虫速效，用量少、活性高、杀虫谱广、持效期长，对环境相容性好等。啶虫脒可用于防治水稻、蔬菜、果树、茶树的半翅目、鳞翅目及鞘翅目等害虫，还可杀卵，因此被广泛应用于农产品和肉制品的害虫防治。按我国农药毒性分级标准，啶虫脒属中等毒性杀虫剂。由于啶虫脒的广泛使用，它已经进入和广泛存在于人类生活环境中，对人类的身体健康和生存环境造成了极大的潜在威胁。因此，有必要采取措施有效监测农产品和肉制品中啶虫脒含量。

目前啶虫脒农药的检测方法主要有仪器分析方法、酶抑制法、免疫分析法、生物传感器法、化学发光技术、比色法等。仪器分析方法主要包括气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、离子色谱法及色谱-质谱联用等，仪器分析方法不足之处在于所需仪器设备价格昂贵，需要有专业人员操作，不适合在现场快速检测。酶抑制法的不足之处在于其敏感度和可重复性有待提高，灵敏度不如仪器法。免疫分析法的不足之处在于易产生假阳性。生物传感器法的不足之处在于目前许多生物传感器技术的稳定性不高，导致实践中存在使用寿命较短等问题。化学发光技术的不足之处在于其信号输出容易受环境的干扰，导致检测结果不可靠。传统的比色法包括目视比色法和光电比色法，其中目视比色法常用的是标准系列法，但缺陷在于眼睛观察存在主观误差，准确度比较低；光电比色法相比于目视比色法虽然消除了主观误差，但测量的准确度、灵敏度仍然低，且应用范围窄。另外，近年来采用的酶抑制法比色检测啶虫脒农药残留，其灵敏度低、成本高。

现有利用纳米金比色检测的方法绝大多数是利用其聚集变色效应，其不足在于：该方法容易受到非靶标引起的非特异性聚集影响，非特异聚集将导致结果不准确，特异性不够。因此，现有的检测方法存在需要专业人员操作、操作复杂、检测时间长、费用高、检测结果不直观、不适合现场快速检测的缺点。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法。本发明不需要专业人员操作，具有操作简便、检测快速、成本低廉、检测结果直观、适合现场检测等优势。

本发明的技术方案：一种基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法，包括有以下步骤：

A：绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线

A1: 制备已知啶虫脒浓度的检测溶液，得A1品；

A2：制备空白对照溶液，得A2品；

A3：取A1品和 A2品进行吸收光谱扫描，测定其735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱；

A4：根据吸收光谱绘制得到啶虫脒吸光度变化量标准曲线；

B、根据啶虫脒吸光度变化量标准曲线建立有关啶虫脒浓度与啶虫脒吸光度值之间相互关系的线性回归方程；

C:制备未知啶虫脒浓度的待测溶液，得C品；

D: 取C品进行吸收光谱扫描，测定其在735 nm波长处的吸光度值，计算C品与A2品的吸光度差值，将该吸光度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中啶虫脒的浓度。

前述的基于纳米酶催化的啶虫脒快速比色检测方法中，所述绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线的具体方法为：

A1: 制备已知啶虫脒浓度的检测溶液，包括：

A1-1：取多支刻度离心管，分别加入啶虫脒核酸适配体序列溶液和纳米金溶液，混匀后孵育，然后每支刻度离心管对应加入一种已知浓度的啶虫脒标准液，混匀后再孵育，得A1-1品；

A1-2：在A1-1品中加入醋酸钠缓冲液，然后再加入H₂O₂溶液和ABTS溶液混匀即可制备得到检测溶液，为A1品；

A2：取1支刻度离心管，用三蒸水替代已知浓度的啶虫脒标准液，按照A1-1和A1-2的方法即可制备得到空白对照溶液，为A2品；

A3：取A1品和A2品进行吸收光谱扫描，测定其在735 nm波长处的吸光度值，获得其吸收光谱；

A4：根据吸收光谱，将不同浓度的A1品与A2品之间的吸光度差值作为纵坐标，啶虫脒浓度作为横坐标绘制啶虫脒吸光度变化量标准曲线；

所述步骤B中的线性回归方程为，y=0.000252C + 0.00464，y为吸光度差值=含啶虫脒的待测品的吸光度值- A2品的吸光度值，C为啶虫脒浓度；

所述的制备未知啶虫脒浓度的待测溶液C品的具体方法为：