[发明专利]一种灵敏探针及制备方法和利用其检测肠炎沙门氏菌的方法

说明书

一种灵敏探针及制备方法和利用其检测肠炎沙门氏菌的方法，它涉及一种探针及制备方法和探针的应用。本发明的目的是要解决现有探针昂贵、不稳定，抗体容易失活和灵敏度差的问题。一种灵敏探针由抗生素和信号载体制备而成，其制备方法为：一、制备黄棕色乳状液；二、制备羧基化的免疫磁珠；三、制备活化的磁性微球；四、加入重悬液保存；利用灵敏探针检测肠炎沙门氏菌的方法：一、制备肠炎沙门氏菌的免疫层析试纸条；二、待测液体与灵敏探针混合孵育，再逐滴滴加到肠炎沙门氏菌的免疫层析试纸条的样品垫上，反应10分钟，读取结果。本发明只有一种抗体划在硝酸纤维素膜上直接进行检测，大大节省了成本，简单，方便。本发明适用于检测肠炎沙门氏菌。

技术领域

本发明涉及一种探针及制备方法和探针的应用。

背景技术

细菌感染性疾病导致的死亡人数占全球死亡人数的三分之一，这一直是一个重要的公共卫生问题。因此，早期识别细菌的感染通过即时检测(POC)对水，食物和临床诊断的安全至关重要。免疫层析试纸条，由于其制备和操作方便，成本低，一次性使用，检测时间短，结果直观可靠等优点，不需要专门的设备，是最常见的即时检测诊断工具，用于各种蛋白质、抗生素、金属离子、毒素等的检测。典型的夹心试纸条使用具有特异性的生物成分，如抗体，基于抗原抗体特异性结合原理，样品中的靶分子与结合垫上的金标抗体探针反应形成靶分子-金标探针复合物，此复合物再与在硝酸纤维素(NC)膜上测试的另一配对的抗体结合诱导出肉眼可见的颜色变化。

虽然试纸条的工作原理很简单，但不能直接应用于实际样品中食源性细菌的检测，因为食品样品中细菌的浓度非常低，大部分都是食物残渣。可以通过使用磁性纳米颗粒来解决这个问题，这使得靶细菌从大量样品溶液中捕获，分离和浓缩成小体积的溶液进行检测。然而，由于抗体的活性易受环境影响，在不同样品中，如有机样品提取中会失活，如材料标记过程中pH，盐等，都对抗体的活性有影响；对于夹心形式而言，制备抗体本身很困难，筛选到能识别同一靶目标的不同表位能形成配对的抗体更难，且成本高，灵敏度差，对肠炎沙门氏菌的最低检测限为400CFU/mL～10⁵CFU/mL。

发明内容

本发明的目的是要解决现有探针昂贵、不稳定，抗体容易失活和灵敏度差的问题，而提供一种灵敏探针及制备方法和利用其检测肠炎沙门氏菌的方法。

一种灵敏探针由抗生素和信号载体制备而成；所述的抗生素为氨苄青霉素；所述的信号载体为羧基化的免疫磁珠。

一种灵敏探针的制备方法，具体是按以下步骤完成的：

一、将FeCl₃·6H₂O和二水合柠檬酸三钠加入到乙二醇中，再在温度为36℃～37℃和转速为200r/min～300r/min的气浴摇床中溶解30min～60min，再加入醋酸钠，再在温度为36℃～37℃和转速为200r/min～300r/min的气浴摇床中溶解30min～60min，得到黄棕色乳状液；

步骤一中所述的FeCl₃·6H₂O的质量与乙二醇的体积比为(0.5g～1g):(10mL～30mL)；

步骤一中所述的FeCl₃·6H₂O与二水合柠檬酸三钠的质量比为(0.5～1):(0.1～0.4)；

步骤一中所述的FeCl₃·6H₂O与醋酸钠的质量比为(0.5～1):(1～2)；

二、将步骤一中得到的黄棕色乳状液转移至聚四氟乙稀内衬的反应釜中，再将聚四氟乙稀内衬的反应釜在温度为190℃～210℃的烘箱中放置8h～12h，再自然冷却至室温，得到黑褐色产物；首先使用无水乙醇对黑褐色产物清洗3次～5次，再使用超纯水对黑褐色产物清洗3次～5次，最后在温度为60℃～70℃下烘干，得到羧基化的免疫磁珠；