[发明专利]一种CAR‑T细胞的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，更具体地说，涉及一种CAR-T细胞的制备方法。

背景技术

CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法)是通过基因修饰获得携带识别肿瘤抗原特异性受体T淋巴细胞的个性化治疗方法。

目前，CAR-T细胞(即嵌合抗原受体T细胞)的培养采用培养瓶或培养皿于洁净的实验室内进行，培养过程过无规范流程，难以实现CAR-T细胞的大规模培养。

综上所述，如何提供一种适用于CAR-T细胞的制备方法，以便于实现CAR-T细胞的大规模生产，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种CAR-T细胞的制备方法，其利用分离培养罐制备CAR-T细胞，步骤规范，便于实现CAR-T细胞的大规模生产。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种CAR-T细胞的制备方法，用于全封闭的CAR-T细胞制备设备，包括：

1)将血液样本和等体积的淋巴细胞分离液加入分离培养罐中进行离心分离以获得单个核细胞；

2)对所述单个核细胞进行分选以获得T细胞；

3)在所述分离培养罐中对所述T细胞进行诱导培养；

4)将带有目的基因的载体和经过诱导培养的T细胞按照预设比例混合后进行基因转导；

5)于所述分离培养罐内对经基因转导的细胞进行扩增培养；

6)获得CAR-T细胞终产品，进行包装。

优选的，上述CAR-T细胞的制备方法中，所述步骤1)中分离培养罐以800G离心力转动15min-30min。

优选的，上述CAR-T细胞的制备方法中，所述步骤2)包括：

21)对离心分离获得的单个核细胞进行洗涤；

22)加入带有T细胞对应标志物抗体的磁珠以对所述分离培养罐中的单个核细胞进行孵育；

23)使所述磁珠排出所述分离培养罐再进行磁分选以获得T细胞。

优选的，上述CAR-T细胞的制备方法中，所述步骤3)为：向所述分离培养罐中加入所述T细胞所需的诱导培养基和细胞因子。

优选的，上述CAR-T细胞的制备方法中，进行所述步骤3)时需维持所述分离培养罐中温度为37℃，CO₂浓度为5％。

优选的，上述CAR-T细胞的制备方法中，所述步骤5)为：向所述分离培养罐中加入培养基和细胞因子，排出所述分离培养罐中的废液。

优选的，上述CAR-T细胞的制备方法中，进行所述步骤5)时需每间隔预设时间采集所述分离培养罐内的细胞进行样品进行计数和质量监测。

优选的，上述CAR-T细胞的制备方法中，所述步骤6)包括：

61)提取分离培养罐中的细胞样品进行计数和质量监测，并在监测结果为合格时进入步骤62)；

62)将所述分离培养罐中的培养基排出；

63)向所述分离培养罐内加入生理盐水进行细胞洗涤，将形成的上清液排出；

64)收集CAR-T细胞终产品，进行包装。

本发明提供一种CAR-T细胞的制备方法，用于全封闭的CAR-T细胞制备设备，其包括：1)将血液样本和等体积的淋巴细胞分离液加入分离培养罐中进行离心分离以获得单个核细胞；2)对上述单个核细胞进行分选以获得T细胞；3)在分离培养罐中对T细胞进行诱导培养；4)将带有目的基因的载体和经过诱导培养的T细胞按照预设比例混合后进行基因转导；5)于分离培养罐内对经基因转导的细胞进行扩增培养；6)获得CAR-T细胞终产品，进行包装。

上述CAR-T细胞的制备方法中，利用分离培养罐制备CAR-T细胞，相比于现有技术中利用培养皿体外培养CAR-T细胞的方式，其步骤规范，更便于实现CAR-T细胞的大规模生产。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例提供的CAR-T细胞的制备方法的流程图；

图2为本发明实施例提供的CAR-T细胞的制备设备的结构示意图；

图3为本发明实施例提供的CAR-T细胞的制备设备的另一结构示意图。

具体实施方式