[发明专利]一种用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白物质的方法

说明书

本发明提供一种用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白的物质的方法，包括如下步骤，(1)对燕窝样品进行前处理：将燕窝样品分为两份，一份采用酸水解处理并定容作为酸水解样品，另一份采用碱水解处理并定容作为碱水解样品，将酸水解样品和碱水解样品混合，并定容，作为前处理样品；(2)柱前衍生化处理：将所述前处理样品用OPA、FMOC分别对其中的一级、二级氨基酸进行柱前衍生化，获得待测样品；(3)将待测样品和标准样品分别进行高效液相色谱检测分析，通过比较二者的检测图谱，判断待测样品中是否含有羟脯氨酸和/或肌氨酸，所述标准样品中含有羟脯氨酸和/或肌氨酸的标准物。本发明的方法，有助于燕窝质量的判定，且分析过程快速、检测灵敏。

技术领域

本发明属于燕窝鉴别分析技术领域，尤其涉及一种用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白物质的方法。

背景技术

燕窝(Cubilose)为雨燕科动物金丝燕及同属多种金丝燕用唾液和少量羽毛混合黏结所筑成的巢窝。根据现代研究表明，燕窝中含有丰富的活性唾液酸糖蛋白、矿物质、碳水化合物、维生素及氨基酸等多种天然营养物，并且有补中益气、滋阴润燥等功效，是名贵滋补食品之一。

人们对燕窝及其相关的产品的需求不断增加，目前市场上燕窝行业没有统一的产品标准，质量参差不齐，部分不法商人为得到更高的利润以次充好，甚至以假乱真，而无法直接鉴定是否加入了燕窝及所加燕窝的品质，因此往往需要对燕窝质量进行有效地判定，但目前通过测定燕窝中氨基酸的组成或唾液酸含量进行判定的方法，其鉴定结果的准确性偏低，过程复杂等不足。

现有常用的氨基酸检测仪器有氨基酸分析仪、液相色谱仪。氨基酸分析仪采用阳离子交换色谱分离、柱后茚三酮衍生分光光度检测技术，此法仪器的检测过程耗时长达1小时，仪器在运行时茚三酮沉淀容易堵塞管路，且重现性不理想。

发明内容

本发明为弥补现有技术的不足，提供一种用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白的物质的方法，该方法有助于燕窝质量的判定，且分析过程快速、简单有效、检测灵敏。

本发明为达到其目的，采用的技术方案如下：

一种用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白的物质的方法，依次包括如下步骤，

(1)对燕窝样品进行前处理：将燕窝样品分为两份，一份采用酸水解处理并定容作为酸水解样品，另一份采用碱水解处理并定容作为碱水解样品，将酸水解样品和碱水解样品混合，并定容，作为前处理样品；两份并无特定配比要求，只要最后上机检测时在检测范围内即可。

(2)柱前衍生化处理：将所述前处理样品用OPA、FMOC分别对其中的一级、二级氨基酸进行柱前衍生化，获得待测样品；

(3)将待测样品和标准样品分别进行高效液相色谱检测分析，通过比较二者的检测图谱(出峰位置、及保留时间)，判断待测样品中是否含有羟脯氨酸和/或肌氨酸，所述标准样品中含有羟脯氨酸和/或肌氨酸的标准物。

优选的，所述高效液相色谱检测分析的色谱条件包括：色谱柱为HPH-C18，柱温为45℃，以1.5mL/min的流速进行梯度洗脱，检测器采用FLD荧光检测器。

优选的，FLD荧光检测器进行检测的条件包括：0～10.35min时，EX＝340nm，EM＝450nm，增益为10；10.35min时波长切换到EX＝266，EM305nm，增益为9。

优选的，切换波长的时间间隔控制在0.1min以上。

优选的，所述梯度洗脱采用的流动相由流动相A和流动相B组成，其中流动相A为10mM Na₂HPO₄，流动相B为体积比45:45:10的乙腈、甲醇和水的混合溶液。