[发明专利]聚离子液体磁性纳米复合物及其对痕量循环肿瘤细胞特异性富集和检测的应用

权利要求书

1.一种能够对痕量循环肿瘤细胞特异性富集和检测的聚离子液体磁性纳米复合物，其特征在于它由如下步骤制备而成：

（A）羧基功能化离子液体单体的合成：将溴乙酸和1-乙烯基咪唑在甲苯中于50～60 ℃下反应，得到羧基功能化离子液体单体；

（B）Fe₃O₄/SH磁性纳米球的合成：将Fe₃O₄磁性纳米球分散在溶剂中，加入3-巯基丙基三甲氧基硅烷进行反应，得到Fe₃O₄/SH磁性纳米球；

（C）聚离子液体功能化磁珠的合成：将Fe₃O₄/SH磁性纳米球与羧基功能化离子液体单体和交联剂在乙醇中混合后，加入引发剂于60～80℃进行聚合反应，得到聚离子液体功能化磁珠MNs；

所述交联剂的合成方法为：将1-乙烯基咪唑和1,4-二溴丁烷在甲醇中混合后，在50～60 ℃搅拌反应，反应后将反应混合物冷却，然后加入乙醚中，将所得的半透明溶液冷置后分离产物，洗涤干燥；

（D）聚离子液体磁性纳米复合物的制备：将MNs分散于含EDC和NHS的PBS溶液中进行活化，然后通过磁场分离活化的MNs，将其重新悬浮于PBS溶液中，加入EpCAM抗体进行孵育，多次洗涤，得到聚离子液体磁性纳米复合物IMNs。

2.根据权利要求1所述的聚离子液体磁性纳米复合物，其特征在于所述Fe₃O₄磁性纳米球由FeCl₃在乙二醇和水中溶解后与乙酸钠和聚乙二醇反应后制得。

3.根据权利要求1所述的聚离子液体磁性纳米复合物，其特征在于在步骤（B）中，所述溶剂为甲苯，Fe₃O₄磁性纳米球与3-巯基丙基三甲氧基硅烷的用量比为1:0.1～3g/mL，反应温度为60～100℃；反应后的产物冷却后，依次用甲苯、甲醇、去离子水和乙醇洗涤，然后干燥，置于1～5 ℃的条件下备用。

4.根据权利要求1所述的聚离子液体磁性纳米复合物，其特征在于在步骤（C）中，反应后将获得反应物冷却、清洗、干燥后，置于1～5 ℃的条件下备用；其中Fe₃O₄/SH磁性纳米球与羧基功能化离子液体单体和交联剂的用量比分别为1:0.01～0.04g/mol，所述引发剂为AIBN。

5.根据权利要求1所述的聚离子液体磁性纳米复合物，其特征在于在步骤（D）中，先将MNs分散于含EDC和NHS的pH 6.7～6.9的PBS的溶液中进行活化，然后通过磁场分离活化的MNs，再用pH 7.3～7.5的PBS洗涤，将其重新悬浮于pH 7.3～7.5的PBS溶液中，加入EpCAM抗体进行孵育，然后用pH 7.3～7.5的PBS洗涤，最后将其储存于pH 7.3～7.5的PBS中，置于1～5 ℃的条件下保存。

6.根据权利要求1所述的聚离子液体磁性纳米复合物，其特征在于在步骤（D）中，MNs与EpCAM抗体的质量比为1:0.05～0.2，活化和孵育温度均为1～5 ℃。

7.根据权利要求1所述的聚离子液体磁性纳米复合物，其特征在于所述羧基功能化离子液体单体的制备方法为：将溴乙酸溶于甲苯后，缓慢加入 1-乙烯基咪唑，在50～60 ℃下搅拌反应，反应后分离出固体，干燥即得。

8.根据权利要求1所述的聚离子液体磁性纳米复合物，其特征在于所述Fe₃O₄磁性纳米球的合成方法为：取FeCl₃、乙二醇和水混合搅拌至溶解， 随后加入乙酸钠和聚乙二醇进行高速搅拌，得到透明溶液，然后在高压釜中于160～210 ℃进行反应，反应后将所得产物冷却、洗涤、干燥，即得。