[发明专利]体外检测上皮肿瘤细胞培养物对治疗剂反应性的方法和试剂盒

说明书

本发明涉及体外检测上皮肿瘤细胞培养物对治疗剂反应性的方法和试剂盒。本发明的方法和试剂盒可特别用于进行抗肿瘤治疗剂的体外筛选或药物研发。

技术领域

本发明涉及体外检测上皮肿瘤细胞培养物对治疗剂反应性的方法和试剂盒。本发明的方法和试剂盒可特别用于进行抗肿瘤治疗剂的体外筛选。

背景技术

尽管不断努力改进诊断和治疗，但癌症仍然是全球死亡的主要原因。癌症的多样性或异质性对新疗法的发展构成障碍，也难以识别可能的应答者。此外，许多癌症治疗受到原发耐性(primary resistance)和获得性耐性(acquired resistance)的挑战，包括绕开治疗试剂靶点的替代途径和额外的点突变。

未来成功的治疗方法可能依赖于对肿瘤进展和转移过程所依据的事件的综合分析，以及快速和非选择性生成患者来源的原代肿瘤细胞的发展，所述细胞可以容易地操作以准确评估化学治疗剂和靶向治疗剂的功效。

作为一个例子，已经描述了使用经辐射的饲养细胞和Rho激酶抑制剂Y27632的癌细胞的原代培养物来促进异源肿瘤上皮细胞的生长并调查个体患者的药物敏感性(参见例如Liu等人，Am J Pathol， 180：599-607，2012)。然而，当仅仅接种来自患者肿瘤的分离的单个细胞时，这些共培养条件受到基质细胞及正常上皮细胞过度生长的困扰。

解决这种基质细胞污染的一种方法是使用FACS来净化上皮细胞粘附分子(EpCAM)阳性细胞亚群。但是基于细胞表面标志物表达的纯化增加了来源于原始患者肿瘤的肿瘤细胞的克隆选择的风险，因此通常不能公平地代表原始患者肿瘤的克隆多样性。

因此，需要开发用于在饲养细胞和Rock抑制剂系统中富集原代上皮肿瘤细胞的改善的培养条件，其不仅降低基质细胞和/或正常上皮细胞生长，而且还维持原始肿瘤样品的克隆多样性。

另外，目前所用的体外药筛方法由于体外重编程培养过程中出现正常细胞的干扰以及使用的筛选手段的限制，最终往往无法快速有效地获得体外药筛的准确结果。因此，也需要一种能够防止正常细胞的干扰、准确性提高的体外药物筛选方法。

发明内容

本发明涉及用于体外检测人上皮肿瘤细胞培养物对治疗剂的反应性的方法，包括：

(a)将包含人上皮肿瘤细胞的人离体来源的癌组织起源球状体 (CTOS)解离成基本上单细胞的悬浮液，

(b)在确定成分的细胞培养基中与饲养细胞共培养由步骤(a) 解离的CTOS，所述确定成分的细胞培养基包含至少一种Rho相关的含盘绕圈的蛋白激酶(ROCK)抑制剂，并且不含或基本不含骨形态生成蛋白(BMP)抑制剂和Wnt/β-连环蛋白信号通路激动剂，

(c)将治疗剂施用到步骤(b)得到的培养物中，和

(d)测量上皮肿瘤细胞增殖和/或上皮肿瘤细胞凋亡，

其中上皮肿瘤细胞增殖的减少和/或上皮肿瘤细胞凋亡的诱导指示了培养物对治疗剂的反应性，其中缺乏上皮肿瘤细胞增殖的减少和/或上皮细胞凋亡的诱导指示了培养物对治疗剂的抗性。

在文本中，癌组织起源球状体(cancer-tissue originated spheroid)亦简称为CTOS。CTOS是现有技术公知的，关于CTOS 的相关讨论、获取和处理方法，可参见：例如，Kondo et al.,PNAS USA.108:6235-6240,2011；Endo et al.,J Thorac Oncol.8:131-9,2013； WO 2012065067；和Liu et al.,Am J Pathol.180:599-607,2012等文献。