[发明专利]一种环保用复合微生物菌剂的液体高密度发酵方法

权利要求书

1.一种环保用复合微生物菌剂的液体高密度发酵方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤A：将含有培养基的摇瓶中接种环保用复合微生物菌种，在温度15~39℃培养箱中震荡培养10~24小时得一级种子液，并控制转速50~300rpm；所述环保用复合微生物菌种由一类菌种、二类菌种和三类菌种按质量比1~2:0.1~3:1~5组成；所述一类菌种为产碱菌、节杆菌、黄杆菌、假单胞菌中一种或两种以上；所述二类菌种为伯克氏菌、短杆菌、假诺卡氏菌、黄单胞菌、芽孢杆菌、棒杆菌、红球菌、鞘氨醇单胞菌、戈登氏菌中一种或两种以上；所述三类菌种为生丝微菌、乳酸杆菌、冢村氏菌中一种或两种以上；

步骤B：将步骤A得到的一级种子液按体积含量为0.5~20%的接种量转接于一级种子罐中，控制一级种子罐内温度15~39℃，罐压0.02~0.08MPa，溶解氧5~65%，培养10~24小时得二级种子液；

步骤C：将步骤B得到的二级种子液按体积含量为5~25%的接种量转接于发酵罐中，控制发酵罐内温度15~39℃，罐压0.02~0.08MPa，溶解氧5~65%，并保持在梯度酸碱度下进行分段发酵即得；

其中，所述步骤C中梯度酸碱度依次为7.4~7.8、6.8~7.2、6.2~6.6和5.2~5.8，每段的发酵时间为5~12.5小时。

2.根据权利要求1所述的一种环保用复合微生物菌剂的液体高密度发酵方法，其特征在于：所述步骤C还包括增加体积含量为2~10%的碳源和/或体积含量为0.5~2%的氮源，碳源的质量浓度为40~60%，氮源的质量浓度为10~20%。

3.根据权利要求1所述的一种环保用复合微生物菌剂的液体高密度发酵方法，其特征在于：所述步骤A中的培养基包括下列成份：葡萄糖1.5~3%，硫酸铵0.2~0.8%，有机氮源0.5~1.5%，磷酸二氢钠0.4~2.5%，乙酸钠0.1~0.3%，七水硫酸镁0.5~1.6%，微量元素0.1-2%。

4.根据权利要求3所述的一种环保用复合微生物菌剂的液体高密度发酵方法，其特征在于：所述微量元素包括无水氯化钙0.03~0.05%，七水硫酸亚铁0.02~0.04%，七水硫酸锌0.01~0.02%，五水硫酸锰0.005~0.02%，五水硫酸铜0.0001~0.0008%，硼酸0.0001~0.0005%。

5.根据权利要求3所述的一种环保用复合微生物菌剂的液体高密度发酵方法，其特征在于：所述有机氮源为玉米浆、玉米浆干粉和酵母粉中的一种或二种以上的混合物。

6.根据权利要求2所述的一种环保用复合微生物菌剂的液体高密度发酵方法，其特征在于：所述碳源为葡萄糖、蔗糖、糖蜜、果糖、麦芽糖或阿拉伯糖中的一种或两种以上的混合物。

7.根据权利要求2所述的一种环保用复合微生物菌剂的液体高密度发酵方法，其特征在于：所述氮源为氯化铵、硫酸铵、玉米浆、玉米浆干粉、酵母粉中的一种或两种以上混合物。

8.根据权利要求1所述的一种环保用复合微生物菌剂的液体高密度发酵方法，其特征在于：所述步骤C中调整分段发酵的酸碱度使用的酸为磷酸、硫酸、盐酸、乙酸和硝酸中的一种或二种以上混合物，所述步骤C中调整分段发酵的酸碱度使用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水和尿素中的一种或二种以上混合物。