[发明专利]一种环保用复合微生物液体菌剂及其保藏方法

说明书

本发明涉及生物发酵技术领域，尤其一种环保用复合微生物液体菌剂及其保藏方法，包括以下步骤：（1）进行环保用复合微生物的高密度发酵培养，得到高密度发酵液，对高密度发酵液温和离心后，除去上清液，获得菌泥；（2）用0.18‑0.22mol/L磷酸盐缓冲液稀释菌泥，得到稀释后菌液，调整稀释后菌液中微生物的固含量为6‑20%，pH为4.0‑6.0；（3）在稀释后菌液中添加保护剂后，密闭保藏，并置于阴凉干燥处。本发明的保藏方法操作简单，成本低廉，在保证有效微生物含量的前提下，大大延长液体微生物菌剂的保存时间。

技术领域

本发明涉及生物发酵技术领域，尤其一种环保用复合微生物液体菌剂及其保藏方法。

背景技术

目前，市场上的微生物菌剂产品大部分为固体保存状态，固体微生物菌剂产品的保存时间虽然较之液体菌剂产品长，但其制备方法较之液体菌剂产品多了很多设备、工序、人工和成本投入。

一般液体微生物菌剂产品大部分为全发酵液。但发酵液中除了含有大量的有效微生物菌体外，还含有菌体分泌的蛋白(肽)类物质，残留的碳源、氮源等营养物质，所以，在液体微生物菌剂存储过程中会出现酸败，产气现象，有效微生物量也会随之大量减少。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的上述不足，提供一种环保用复合微生物液体菌剂的保藏方法，该方法操作简单，成本低廉，在保证有效微生物含量的前提下，大大延长微生物液体菌剂的保存时间。

本发明的另一目的是提供一种环保用复合微生物液体菌剂产品，

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种环保用复合微生物液体菌剂的保藏方法，包括以下步骤：

（1）进行环保用复合微生物的高密度发酵培养，得到高密度发酵液，对高密度发酵液以转速为2500-4500rpm离心后，除去上清液，获得菌泥；

（2）用0.18-0.22mol/L磷酸盐缓冲液稀释菌泥，得到稀释后菌液，调整稀释后菌液中微生物的固含量为6-20%，pH为4.0-6.0；

（3）在稀释后菌液中添加保护剂后，密闭保藏，并置于阴凉干燥处。

优选地，稀释后菌液中添加保护剂后，置于空气相对湿度在60%以下，温度不超过20℃的环境下密闭保藏。

优选地，所述保护剂由对羟基苯甲酸，吐温20，海藻糖和维生素C组成，对羟基苯甲酸、吐温20、海藻糖和维生素C的添加量分别为稀释后菌液重量的0.1-0.6%、0.5-2%、2-10%和0.1-0.5%。本发明的保护剂具有营养剂成分，根据复合微生物菌剂的菌剂特性添加于稀释后菌液中，可有效保持菌剂性能，在保证有效微生物含量的前提下，大大延长微生物液体菌剂的保存时间。

可满足微生物液体菌剂应用于环境污染物处理的需要，具有较高的实用价值。

优选地，所述步骤（1）中，环保用复合微生物的高密度发酵培养包括以下步骤：

步骤A：将环保用复合微生物菌种接种于含基础培养基的摇瓶中，在15-39℃下震荡培养10-24h，震荡培养转速为50-300rpm，得一级种子液；

步骤B：将步骤A得到的一级种子液按0.5-20%的接种量转接于一级种子罐中，培养10-24h，培养温度为15-39℃，罐压为0.02-0.08MPa，溶解氧浓度为5-65%，得二级种子液；

步骤C：将步骤B得到的二级种子液按5-25%的接种量转接于发酵罐中进行分段发酵，各段发酵的pH依次调整为7.4-7.8、6.8-7.2、6.2-6.6和5.2-5.8，各段的发酵时间均为5-12.5 h，发酵温度均为15-39℃，罐压均为0.02-0.08MPa，溶解氧浓度均为5-65%。