[发明专利]一种环保用复合微生物液体菌剂及其保藏方法

权利要求书

1.一种环保用复合微生物液体菌剂的保藏方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）进行环保用复合微生物的高密度发酵培养，得到高密度发酵液，对高密度发酵液以转速为2500-4500rpm离心后，除去上清液，获得菌泥；

（2）用0.18-0.22mol/L磷酸盐缓冲液稀释菌泥，得到稀释后菌液，调整稀释后菌液中微生物的固含量为6-20%，pH为4.0-6.0；

（3）在稀释后菌液中添加保护剂后，密闭，并置于阴凉干燥处保藏；所述保护剂由对羟基苯甲酸、吐温20、海藻糖和维生素C组成，所述对羟基苯甲酸、吐温20、海藻糖和维生素C的添加量分别为稀释后菌液重量的 0.1-0.6%、0.5-2%、2-10%和0.1-0.5%；

所述步骤（1）中，环保用复合微生物的高密度发酵培养包括以下步骤：

步骤A：将环保用复合微生物菌种接种于含基础培养基的摇瓶中，在15-39℃下震荡培养10-24h，震荡培养转速为50-300rpm，得一级种子液；

步骤B：将步骤A得到的一级种子液按0.5-20%的接种量转接于一级种子罐中，培养10-24h，培养温度为15-39℃，罐压为0.02-0.08MPa，溶解氧浓度为5-65%，得二级种子液；

步骤C：将步骤B得到的二级种子液按5-25%的接种量转接于发酵罐中进行分段发酵，各段发酵的pH依次调整为7.4-7.8、6.8-7.2、6.2-6.6和5.2-5.8，各段的发酵时间均为5-12.5h，发酵温度均为15-39℃，罐压均为0.02-0.08MPa，溶解氧浓度均为5-60%；

所述步骤（1）中，所述环保用复合微生物在高密度发酵培养前由第一菌剂、第二菌剂、和第三菌剂复配而成，所述第一菌剂、第二菌剂和第三菌剂的质量比为1-2:0.1-3:1-5；

所述第一菌剂为产碱菌、节杆菌、黄杆菌和假单胞菌中的至少2种；所述第二菌剂为伯克氏菌、短杆菌、假诺卡氏菌、黄单胞菌、芽孢杆菌、棒杆菌、红球菌、鞘氨醇单胞菌和戈登氏菌中的至少7种；所述第三菌剂为生丝微菌、乳酸杆菌和冢村氏菌中的至少2种。

2.根据权利要求1所述的环保用复合微生物液体菌剂的保藏方法，其特征在于：所述基础培养基由以下质量百分比的原料组成：葡萄糖1.5-3%，硫酸铵0.2-0.8%，有机氮源0.5-1.5%，磷酸二氢钠0.4-2.5%，乙酸钠0.1-0.3%，七水硫酸镁0.5-1.6%，微量元素补充剂0.1-2%，水余量。

3.根据权利要求2所述的环保用复合微生物液体菌剂的保藏方法，其特征在于：所述微量元素补充剂包括以下含量的成分：无水氯化钙0.03-0.05%，七水硫酸亚铁0.02-0.04%，七水硫酸锌0.01-0.02%，五水硫酸锰0.005-0.02%，五水硫酸铜0.0001-0.0008%，硼酸0.0001-0.0005%。

4.根据权利要求2所述的环保用复合微生物液体菌剂的保藏方法，其特征在于：所述有机氮源为玉米浆、玉米浆干粉和酵母粉中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的环保用复合微生物液体菌剂的保藏方法，其特征在于：所述步骤C中，调整分段发酵pH值所用酸为磷酸、硫酸、盐酸、乙酸和硝酸中的至少一种，所用碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水和尿素中的至少一种。

6.一种环保用复合微生物液体菌剂产品，其特征在于：由以下制备方法制得：

（1）进行环保用复合微生物的高密度发酵培养，得到高密度发酵液，对高密度发酵液以转速为2500-4500rpm离心后，除去上清液，获得菌泥；

（2）用0.18-0.22mol/L磷酸盐缓冲液稀释菌泥，得到稀释后菌液，调整稀释后菌液中微生物的固含量为6-20%，pH为4.0-6.0；

（3）在稀释后菌液中添加保护剂后，密闭，得到环保用复合微生物液体菌剂产品；其中，所述保护剂由对羟基苯甲酸、吐温20、海藻糖和维生素C组成，所述对羟基苯甲酸、吐温20、海藻糖和维生素C的添加量分别为稀释后菌液重量的 0.1-0.6%、0.5-2%、2-10%和0.1-0.5%；

所述步骤（1）中，环保用复合微生物的高密度发酵培养包括以下步骤：

步骤A：将环保用复合微生物菌种接种于含基础培养基的摇瓶中，在15-39℃下震荡培养10-24h，震荡培养转速为50-300rpm，得一级种子液；

步骤B：将步骤A得到的一级种子液按0.5-20%的接种量转接于一级种子罐中，培养10-24h，培养温度为15-39℃，罐压为0.02-0.08MPa，溶解氧浓度为5-65%，得二级种子液；

步骤C：将步骤B得到的二级种子液按5-25%的接种量转接于发酵罐中进行分段发酵，各段发酵的pH依次调整为7.4-7.8、6.8-7.2、6.2-6.6和5.2-5.8，各段的发酵时间均为5-12.5h，发酵温度均为15-39℃，罐压均为0.02-0.08MPa，溶解氧浓度均为5-60%；

所述步骤（1）中，所述环保用复合微生物在高密度发酵培养前由第一菌剂、第二菌剂、和第三菌剂复配而成，所述第一菌剂、第二菌剂和第三菌剂的质量比为1-2:0.1-3:1-5；

所述第一菌剂为产碱菌、节杆菌、黄杆菌和假单胞菌中的至少2种；所述第二菌剂为伯克氏菌、短杆菌、假诺卡氏菌、黄单胞菌、芽孢杆菌、棒杆菌、红球菌、鞘氨醇单胞菌和戈登氏菌中的至少7种；所述第三菌剂为生丝微菌、乳酸杆菌和冢村氏菌中的至少2种。