[发明专利]一种CIK细胞培养基

说明书

本发明公开了一种CIK细胞培养基，该CIK细胞培养基为含有胎牛血清的RPMI‑1640培养基，还含有人胱抑素C，人胱抑素C的质量浓度为20‑30mg/L。本发明证明人胱抑素C可以提高CIK细胞的肿瘤杀伤活性，本发明提供的含有人胱抑素C的培养基可以用于诱导培养CIK细胞。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种CIK细胞培养基。

背景技术

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkiller，CIK)是人外周血单个核细胞在白细胞介素-1、白细胞介素-2、抗CD3单克隆抗体和γ-干扰素联合刺激下获得的增殖能力强、细胞毒作用强的免疫效应细胞，在细胞治疗领域发挥着不可替代的作用。

如何提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤力一直是免疫治疗领域研究热点，因为CIK细胞的杀伤力直接关乎细胞治疗的疗效。

发明内容

本发明旨在提供一种CIK细胞培养基，以培养出更具杀伤力的CIK细胞。

本发明通过如下技术方案得以实现：

一种CIK细胞培养基，为含有胎牛血清的RPMI-1640培养基，还含有人胱抑素C，人胱抑素C的质量浓度为20-30mg/L。

优选地，胎牛血清体积浓度为10-20％。

优选地，还含有抗生素。

优选地，抗生素为青霉素和链霉素，青霉素的浓度为100U/mL，链霉素的浓度为120U/mL。

人胱抑素C在提高CIK细胞对肿瘤杀伤活性方面的应用。

优选地，所述肿瘤为人髓性白血病。

本发明优点：

本发明提供的培养基可以有效提高CIK细胞对肿瘤的杀伤力。

附图说明

图1为不同组CIK细胞对K562细胞的杀伤率(％)。

具体实施方式

为了更好地解释本发明的技术方案，下面结合具体实施例进一步介绍。实施例中未特别强调的实验材料均为常规实验材料，属于本领域技术人员易于获得的范畴。

实施例1：

一、实验材料

RPMI-1640培养液，美国Gibco公司；

胎牛血清，美国Gibco公司；

人胱抑素C，桂林英美特生物技术有限公司，货号KAY0001，纯度>96％。

二、实验方法

1、CIK细胞的培养扩增

取肝素抗凝的健康志愿者外周血20ml，用淋巴细胞分离液密度梯度离心(2400×g，20min)，轻轻吸取灰白色层的单个核细胞，用生理盐水洗涤3次，以RPMI-1640培养液调整细胞密度为5×10⁶/mL，加到培养瓶内，每瓶15mL，置37℃、5％CO₂培养箱中培养2h，轻轻摇匀，吸出悬浮细胞，离心后去上清分为两组进行培养：

(A)常规组：用含有胎牛血清(体积浓度15％)和IFN-γ(1000U/mL)的RPMI-1640培养基调节细胞密度为2.5×10⁶/mL，然后于37℃、5％CO₂培养箱内培养24h后再加入IL-2(500U/mL)、抗CD3单抗(25ng/mL)继续培养。

(B)改进组：用终浓度为25mg/L的人胱抑素C代替IFN-γ，其他同常规组。