[发明专利]双sgRNA介导的基因精确修饰方法及应用有效
| 申请号： | 201710630648.0 | 申请日： | 2017-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN107267516B | 公开（公告）日： | 2020-09-29 |
| 发明（设计）人： | 阮进学;李奎;牟玉莲;李训碧;李华;于辉 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N5/10;C12N15/90 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 王国标 |
| 地址： | 528000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | sgrna 基因 精确 修饰 方法 应用 | ||
1.一种用于构建囊肿性纤维化模型的双sgRNA，该双sgRNA的序列为：
sg1:CCUAUGAUGAAUAUAGAUACAGA(SEQ ID NO：1)；
sg508-W:CCAAAGAUGAUAUUUUCUUUAAU(SEQ ID NO：2)。
2.双sgRNA在制备构建囊肿性纤维化模型的试剂中的应用，该双sgRNA的序列为：
sg1:CCUAUGAUGAAUAUAGAUACAGA(SEQ ID NO：1)；
sg508-W:CCAAAGAUGAUAUUUUCUUUAAU(SEQ ID NO：2)。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述囊肿性纤维化模型为囊肿性纤维化的细胞模型、囊肿性纤维化的动物模型。
4.一种双sgRNA介导的构建囊肿性纤维化模型的方法，其特征在于，该方法为：将权利要求1所述的双sgRNA同时转染目标细胞，培养30～60h后，即得囊肿性纤维化细胞模型。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，双sgRNA同时转染目标细胞的转染体系为：106～107个细胞，1～2μg sg1，1～2μg sg508-W，8～12μg Cas9蛋白，8～12μg Oligo，100～150μl电转液。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，双sgRNA同时转染目标细胞的转染条件为在620V，30ms的条件下进行电转。
7.一种用于构建囊肿性纤维化模型的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有权利要求1所述的双sgRNA或/和该双sgRNA的转录模板。
8.引物组在制备权利要求1所述双sgRNA中的应用，所述引物组的序列为：
sg1-F：TGTAATACGACTCACTATAGGTCTGTATCTATATTCATCATgttttagagctagaaatagc(SEQID NO：3)；
sg508-W-F：TGTAATACGACTCACTATAGGATTAAAGAAAATATCATcttgttttagagctagaaata gc(SEQ ID NO：4)；
sg-R：AAAAGCACCGACTCGGTGCC(SEQ ID NO：5)。
9.一种用于构建囊肿性纤维化模型的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有用于制备权利要求1所述的双sgRNA的引物组，所述引物组的序列为：
sg1-F：TGTAATACGACTCACTATAGGTCTGTATCTATATTCATCATgttttagagctagaaatagc(SEQID NO：3)；
sg508-W-F：TGTAATACGACTCACTATAGGATTAAAGAAAATATCATcttgttttagagctagaaata gc(SEQ ID NO：4)；
sg-R:AAAAGCACCGACTCGGTGCC(SEQ ID NO：5)。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，该试剂盒中还含有质粒px330。
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