[发明专利]一种在炎性环境下保持稳定的耐受性树突状细胞的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及一种在炎性环境下保持稳定的耐受性树突状细胞的制备方法及其应用。本发明采用靶向型抑制mTOR信号通路蛋白磷酸化的单体结构化合物，对人树突状细胞进行体外耐受性短时诱导和培养，结果显示，本发明制备的tDC在炎性分子刺激时，依旧保持稳定的耐受调节功能。本发明建立了一种新的tDC的制备方法，在适度浓度和时间内，既保证细胞制品的存活率，又得到在炎性环境下依然稳定保持耐受功能的tDC细胞制品。本发明制备方法采用的原材料容易通过GMP认证，制备过程简单，便捷，经济，制备成品稳定，有效，易标准化。本发明制备的tDC可用于过继性输注治疗多种变态免疫反应性疾病，临床运用潜力巨大。

技术领域

本发明涉及细胞体外诱导培养技术领域，具体地说，是一种在炎性环境下保持稳定的耐受性树突状细胞的制备方法及其应用。

背景技术

机体的免疫系统起着排除“非己”维持内环境稳定的重要作用，一旦发生免疫能力异常增强，在外源性或内源性的因素促发下，就会发生变态免疫反应性疾病，主要包括过敏性疾病(过敏性哮喘，过敏性紫癜等)，自生免疫反应性(多发性硬化症，重症肌无力等) 以及移植物抗宿主症(输血相关免疫反应，骨髓和器官移植相关GVHD)。轻者迁延不愈，重者威胁生命。这些患者自身的免疫细胞往往处于严重失调的状态，因此诱导过继性耐受细胞进行免疫治疗，即通过输注具有调节耐受效应的细胞，使患者体内的变态免疫性反应受到抑制，输入少量细胞即能调节整个机体免疫状态的作用，具有安全性高效性的特点，是现代比较前沿的治疗策略。

树突状细胞(dendritic cells，DC)是目前所知的惟一能激活未致敏初始型T细胞(T cells)功能最强的专职抗原提呈细胞。DC能吞噬抗原并对T细胞进行递呈，又能被病原体相关分子模式或者临近组织细胞制造的组织因子直接激活，能发展获得性免疫反应，又能引发快速的天然免疫反应；处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节，几乎所有的变态免疫性疾病均被报道与DC相关。然而，在体内，DC能通过调适选定自身成熟的属性，即改造自己成为T_H1细胞，T_H2细胞，T_H17细胞或调节性T细胞(Regulatery T cells， Treg)诱导性的表型，来调节不同T_H细胞亚群的发育，最终影响机体免疫的方向，由此成为了近年来细胞治疗变态免疫性疾病研发的重点靶细胞之一。

近年来发现中间发育状态的DC，也叫半成熟DC(semi-mature DC)，这类细胞一般在未成熟DC(immature DC，imDC)阶段接受特定抑制信号的诱导，在接受成熟刺激后，其成熟分子和细胞因子表达处于中间态或部分偏向成熟或未成熟DC，并表现为强耐受诱导能力而极具临床应用价值。这种具有耐受诱导能力的Semi-mature DC和imDC统称为耐受性树突状细胞(tolerogenic dendritic cell，tDC)。这tDC原先是在肿瘤周边发现被利用来逃避机体免疫监视，在促进效应性T细胞凋亡或者调节性T细胞扩增后，有效诱导免疫不应答。