[发明专利]一种快速分析壮阳保健品中非法添加西地那非类似物的方法

权利要求书

1.一种筛选西地那非衍生物快速检测条件的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：以西地那非的中间体3-(6,7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑[4,3-d]嘧啶-5-yl)-4-乙氧基-苯磺酰为关键中间体，基于构效关系设计西地那非衍生物目标分子；

步骤二：配体与PDE-5复合物晶体结构进行虚拟对接

采用药物设计对接平台Discovery Studio 3.0进行步骤一目标分子与PDE-5复合物晶体结构活性腔对接，选择Libdock分子对接技术，根据对接后打分函数，选择评分高的西地那非衍生物；

步骤三：密度泛函方法预测西地那非衍生物的理论拉曼图谱

采用GAUSS VIEW 5.0对分子构型进行优化后，选择B3LYP水平的DFT方法，对体系中氢原子加p极化函数和重原子加d的极化函数的6-31G^*(d,p)基组，对步骤二选择的西地那非衍生物进行构型优化后，在Linux系统中，由GAUSSIAN 09软件计算；

步骤四：西地那非衍生物理论共有峰

根据DFT计算结果，采用GAUSSVIEW 5.0软件对计算得到的西地那非衍生物理论拉曼谱图进行理论共有峰归纳；

步骤五：西地那非衍生物的合成及结构验证

合成步骤二选择的西地那非衍生物，经核磁、质谱验证结构；

步骤六：西地那非衍生物结合动力学测定

采用Biacore T200分子相互作用分析系统，依次进样不同浓度的化合物，实验数据采用Biacore T200 evaluation软件分析，采用动力学结合模型拟合计算实验结果；

步骤七：建立西地那非衍生物的TLC-SERS检测条件

称取步骤五制得的西地那非衍生物进行薄层分离，展开体系为二氯甲烷:丙酮:氨水体积比为20:1.5:0.2；

滴加表面增强剂，表面增强剂为金溶胶、有机银溶胶、银溶胶或金银合胶，采用便携式拉曼光谱仪进行扫描；

步骤八：非空白谱图进行处理

采用标准谱图处理软件对非空白谱图进行处理，选取400-1700cm^-1波段作为特征波段，对所述特征波段采用OPUS 5.0软件对谱图进行平滑及基线校正，再对校正后的光谱数据进行矢量归一化处理，得到预处理表面增强拉曼光谱图；

步骤九：对预处理表面增强拉曼光谱图进行判别

TLC-SERS检测得到共有峰与步骤四DFT理论计算得到的共有峰进行整合和归纳，确定西地那非衍生物的共有吸收峰和判定待测样品中含有西地那非衍生物的标准；

步骤十：UPLC-QTOF/MS验证

为现场检测的结果进行进一步确证，避免“假阳性”情况的发生；建立UPLC-TOF/MS检测方法；对新型未知西地那非衍生物的结构进行确证；并分析西地那非衍生物碎片的裂解规律，总结那非类衍生物共有碎片离子，无标准品情况下，根据那非类衍生物共有碎片离子进行判定。