[发明专利]一种从胆汁中提取胆红素和胆酸并联产胆固醇、卵磷脂的方法

权利要求书

1.一种从胆汁中提取胆红素和胆酸并联产胆固醇、卵磷脂的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将新鲜或冷冻的待处理胆囊破裂后，提出胆汁，经过滤去杂后得胆汁，再所得胆汁中加入胆汁量的1%亚硫酸钠和0.2%EDTA钠盐进行碱化处理，并加热至70℃，然后再加10%的氢氧化钠溶液调节pH值至10.5，之后再加热至85℃ ,并保温10min，最后将所得碱化液进行离心处理，收集过滤液，所述过滤液直接喷干后得干粉，其中在喷干过程中控制进风温度为170℃，出风温度为85℃；

(2)将步骤(1)中所得的干粉加入混合溶剂，所述混合溶剂由丙烷、丁烷和乙醚按重量比1:1.5:1.5组成，加入混合溶剂后，在亚临界条件下萃取2～3次得到含脂浸膏和脱脂粉末；其中所述亚临界条件，指在常温条件下，萃取压力为5Mpa，萃取时间为3h；

(3)将步骤(2)中所得的含脂浸膏加入丙酮进行回流萃取，收集滤液和滤渣，所述滤液经蒸发浓缩后用于提取胆固醇，所述滤渣回收用于提取卵磷脂；

(4)将步骤(2)中所得的脱脂粉末加入水和二氯甲烷，在常温条件下搅拌均匀后形成萃取液，经静置分层后，分别收集上层悬浮液和下层红色液，并对收集的上层悬浮液再加入二氯甲烷进行萃取2～4次，萃取至上层悬浮液接近无色为止，收集的萃取液合并下层红色液用于提取胆红素，剩余的上层悬浮液用于提取胆酸；

其中对于步骤(3)中用于提取胆固醇的过程中，具体包括以下步骤：

(1)将所收集的含脂浸膏中加入3倍量的丙酮进行回流萃取，萃取温度为45～50℃，萃取时间为6～8h，分别收集滤液和滤渣；

(2)将步骤(1)中所得的滤液加热至60℃进行蒸发浓缩回收丙酮，并得呈黄色状的浓缩液；

(3)将步骤(2)中所得的浓缩液加入混合溶剂和甲醇钠混合后进行回流醇解，经醇解后过滤去杂，收集滤液；

(4)将步骤(3)中所得的滤液加10%的硫酸调节pH值在5～6之间，然后加入滤液量0.3%的活性炭进行吸附，在温度为50℃条件下回流吸附，回流吸附时间≥0.5h，然后过滤去杂，收集滤液；对收集的滤液再次调节pH值在1～2之间，在温度为50℃条件下回流酸化，回流酸化时间≥4h，经过滤去杂后收集滤液；

(5)将步骤(4)中所得的滤液进行真空蒸发回收混合溶剂，收集的浓缩液加3倍量的水稀释并降至常温，经过滤后取沉淀物，并用水反复洗涤至中性，最后将沉淀物过滤沥干；

(6)将步骤(5)中所得的沉淀物再加10倍量乙醇进行回流溶解，回流溶解温度≥50℃，回流溶解时间为1h，然后将溶解液降温至≤5℃条件下进行结晶，过滤取结晶体，最后将结晶体洗涤后，在温度为70～80℃条件下进行真空干燥，即得精品胆固醇，并避光密封保存；

其中对于步骤(3)中用于提取卵磷脂的过程中，具体包括以下步骤：

(1)将在所收集的滤渣中加入3倍量的85%乙醇进行回流溶解，回流溶解温度≥50℃，回流溶解时间为1h，然后将溶解液过滤，收集滤液；

(2)将步骤(1)中所得的滤液以10%盐酸调节pH值至5，然后加入滤液量0 .3%的活性炭进行吸附，在温度为50℃条件下回流吸附，回流吸附时间≥0 .5h，然后过滤去杂，收集滤液降至常温后，再以10%氢氧化钠调节pH值至7，再经过氧化铝层析柱吸附至终点，收集滤液；

(3)将步骤(2)中所得的滤液以浓度95%的乙醇在常温条件下进行洗脱，洗脱后收取204nm处有吸收值的活性洗脱液；

(4)将步骤(3)中所得活性洗脱液调节pH值至7，在温度为45℃条件下进行真空蒸发浓缩，回收乙醇，经浓缩后得浓缩液，在所得浓缩液中加少量丙酮和水进行洗涤后再进行离心脱水处理后，得沉淀物；

(5)将步骤(4)中所得沉淀物在温度为40～50℃条件下进行真空干燥，即得精品卵磷脂，并避光密封保存；

其中对于步骤(4)中用于提取胆红素的过程中，具体包括以下步骤：

(1)将所收集的脱脂粉末中加入2倍量的水和二氯甲烷，在常温条件下搅拌萃取0 .5h后，形成均匀后形成萃取液，再加入1%的亚硫酸钠溶解，用10%的盐酸调节pH值至4，并避光静置萃取分层，分取上层悬浮液和下层红色液；并对收集的上层悬浮液再加入1倍量的二氯甲烷进行萃取2～4次，萃取至上层悬浮液接近无色为止，收集萃取液并合并下层红色液，得红色混合液；

(2)将步骤(1)中所收集的红色混合液加入0.2%活性炭，在常温条件下避光搅拌0.5h，过滤去杂后，收集滤液；

(3)将步骤(2)中所收集的滤液在温度为40℃条件下进行真空蒸发浓缩，回收二氯甲烷，经浓缩后得浓缩液，在所得浓缩液中加水稀释至沉淀析出，避光并静置至沉淀物完全沉淀析出后，过滤收取沉淀物；

(4)将步骤(3)中所收集的沉淀物加入少量乙醇反复洗涤3～4次，然后再加少量甲醇反复洗涤3～4次，过滤后收取滤液并沥干；

(5)将步骤(4)中所得的沉淀物在温度≤40℃条件下进行真空干燥，即得精品胆红素，并避光密封保存；

其中对于步骤(4)中用于提取胆酸的过程中，具体包括以下步骤：

(1)将收集的上层悬浮液加入其重量10%的氢氧化钠和0 .2%的甲醇钠进行破碱解液，经搅拌溶解后，加热升温至90～95℃，碱解时间为≥6h，其中在温度为40℃时开始回收液体中的二氯甲烷；二氯甲烷回收后，将碱解液降至常温，用10%的盐酸调节pH值至6，静置放置≥2h后，当沉淀物完全析出后，进行离心处理，收取清液；收取的清液中再用10%的盐酸调节pH值在2～3之间，静置放置≥2h后，当沉淀物完全析出后，进行离心处理，收取沉淀物；

(2)将步骤(1)中所收集的沉淀物加入4倍量的75%乙醇，并调节pH值至3，并加入3%的活性炭，在温度为50℃条件下回流吸附，回流吸附时间≥1h，离心过滤；收集滤液再经过聚苯乙烯凝胶层析柱吸附，再以90%乙醇洗脱，洗脱后收取460nm处有吸收值的活性乙醇洗脱液；

(3)将步骤(2)中所收取活性乙醇洗脱液在温度≥80℃条件下进行蒸发回收乙醇，其浓缩液降温至≤5℃后，静放20～30h后，过滤收取沉淀物；

(4)将步骤(3)中所收取沉淀物加入少量90%乙醇反复洗涤2～3次，过滤后收取滤液并沥干；

(5)将步骤(4)中所得的沉淀物在温度为70～80℃条件下进行真空干燥，即得精品胆酸，并密封包装。

2.根据权利要求1所述的从胆汁中提取胆红素和胆酸并联产胆固醇、卵磷脂的方法，其特征在于：在用于提取胆固醇的过程中，其中在所述步骤(3)中所加入的混合溶剂由乙醇与正己烷按其重量比1:1.5组成，其加入量为浓缩液5倍量的混合溶剂和6%的甲醇钠，经充分混合后进行回流醇解，其中醇解温度为50℃，醇解时间≤1h，经醇解后过滤去杂，收集滤液。