[发明专利]一种蜕膜和绒毛配对组织芯片、制备方法及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种蜕膜和绒毛配对组织芯片、制备方法及其应用。本发明将正常妊娠或病理妊娠患者的蜕膜和绒毛标本设置在组织芯片点样孔中，制成成组织芯片，使源自同一病例标本的蜕膜和绒毛组织形成配对，实现生理结构上的母‑胎界面在组织芯片上的功能呈现。其优点表现在：1)高通量，一次即获大量信息，成百上千倍地提高效率；2)并行化，可比性强、准确性高；3)实验误差小，实验条件保持一致；4)便于设置各种实验对照，且大量缩减研究费用。本发明可用于病理妊娠病因筛查及分子分型、新型标志物筛选与验证、个体化治疗患者筛选以及疗效和预后判断等，对于正常妊娠维持机制和病理妊娠发病机制的研究具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，是一种蜕膜和绒毛配对组织芯片、制备方法及其应用。

背景技术

生物芯片是指包被在硅片、尼龙膜等固相支持物上的高密度组织、细胞、蛋白质、核酸、糖类以及其他生物组分的高通量微阵列。利用高通量生物芯片，通过特异性分子杂交及染色技术，对受检样本进行检测，可准确、快速获取大量的分子检测信息。目前已广泛应用于生命科学研究、临床医学分子诊断、以及生物抗体靶向药物筛查和验证等领域。组织芯片技术可将成百上千不同个体、不同来源的临床组织标本根据研究的目的，按预先设计的顺序集成在一张固相载体上进行分析。研究者可在相同的条件下对大量正常或疾病，以及疾病发展不同阶段的病理生理状态下的组织样本中的某一个或多个特定的基因、蛋白质或与其相关的表达产物进行平行分析研究。组织芯片的制作有手工制作和机械制作两种，其基本流程包括：建立高质量的组织样本库、设计并拟定组织芯片、核对组织相关疾病的病理诊断、组织定位、阵列蜡块的制作、组织芯片切片等。在组织芯片制作过程中，受体蜡块的石蜡质量对于构建一个完整的组织芯片具有极其重要作用。构建熔点、硬度和柔韧性等物理特性能达到最佳状态的受体石蜡是制备优质组织芯片的必要条件和基础。组织芯片受体蜡块的软硬度应当与供体组织芯相似，现有技术受体蜡块的软硬度是通过在石蜡溶液中加入蜂蜡来调节硬度，本发明在制备蜕膜组织芯的过程中，加入蜂蜡后仍然存在裂痕现象，组织芯染色后仍有掉片情况。因此针对不同组织芯的特点，提供与组织芯匹配的受体蜡块，提高组织芯与受体蜡块的相容性，避免组织芯片制作过程中掉片，提高组织芯片利用效率，是高质量组织芯片的制备基础。

正常妊娠是一个复杂的生理过程，胎儿虽携有遗传自父系的HLA抗原，但却并未引发母体产生针对胎儿这种特殊半同种“天然移植物”的排斥。妊娠期母-胎间存在着复杂的分子对话机制，以维持胎儿胎盘正常发育。妊娠早期胎儿绒毛外滋养细胞(EVT)侵入蜕膜组织，与母体蜕膜免疫细胞(DIC)及蜕膜基质细胞(DSC)直接接触，形成精细调控的母-胎界面。母-胎界面主要由3种细胞构成：胚胎来源的滋养细胞(trophoblast,Tro)，母体来源的蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)和蜕膜免疫细胞(decicidual immune cell,DIC)。作为母-胎界面唯一携带有父系抗原的滋养细胞，其侵袭与迁移是胚泡着床、胎盘发育，并建立母-胎关系的关键步骤。蜕膜基质细胞除参与蜕膜营养供应之外，还分泌多种活性分子调节胚泡着床与胎盘发育，并作为免疫潜能细胞，参与抗原提呈和分泌细胞因子，发挥重要的免疫调节作用。蜕膜免疫细胞是母-胎免疫耐受的基础，通过表达特殊的活化标记和分泌大量的细胞因子，在母-胎界面局部发挥着不同于外周的免疫调节作用。正常生理妊娠时母-胎界面呈现Th2型免疫优势和调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)扩增现象，一旦这种耐受状态被打破，Th1型免疫反应占优势，将导致妊娠失败或妊娠并发症如复发性流产、子痫前期等。对母－胎界面形成的深入研究是揭示正常妊娠维持机制和病理妊娠发病机制的重要途径和手段，因此针对蜕膜和绒毛的特点，提供一种蜕膜和绒毛配对组织芯片及其制备方法，对母-胎界面形成、病理妊娠病因筛查、新型标志物筛选与验证、个体化治疗患者筛选以及疗效和预后判断具有重要意义，而现有技术中尚未发现利用蜕膜和绒毛组织制备组织芯片的技术及应用的报道。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供一种蜕膜和绒毛配对组织芯片。