[发明专利]一种可检测6种养殖鱼类细菌性疾病的抗体芯片

权利要求书

1.一种可检测6种养殖鱼类细菌性疾病的抗体芯片，其特征在于，包括把6种鱼类细菌性疾病的抗体以及6种鱼类细菌性疾病的混合抗体以微阵列的形式，微阵列布局为8行×6列，均匀固定在固相载体表面，制备获得抗体芯片。

2.根据权利要求1所述的可检测6种养殖鱼类细菌性疾病的抗体芯片，其特征在于，所述细菌性病菌的病原菌包括哈维弧菌、嗜水气单胞菌、柱状屈挠杆菌、迟缓爱德华氏菌、海分支杆菌和荧光假单胞菌。

3.根据权利要求2所述的可检测6种养殖鱼类细菌性疾病的抗体芯片，其特征在于，所述固相载体包括玻璃片、硅片、硝酸纤维素膜、PVDF膜和云母片。

4.一种权利要求1所述的抗体芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、固相载体的预处理；

S2、哈维弧菌、嗜水气单胞菌、柱状屈挠杆菌、迟缓爱德华氏菌、海分支杆菌和荧光假单胞菌抗血清进行纯化，使用辣根过氧化物酶标试剂盒对抗体进行标记；标记后的抗体进行混合；

S3、使用pH7.0～8.0的20～30％的PBS缓冲液稀释纯化后的血清进行稀释，稀释浓度为0.1～3mg/mL，4℃保存备用；

S4、室温下，使用微阵列芯片点样仪进行点样，设置阳性对照和阴性对照点，点样完成后，25～28℃固定3～5h，4℃保存备用。

5.一种权利要求1所述的抗体芯片的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、将已点样的载体从4℃取出，置于室温平衡20min，PBS洗涤3次，每次3～5min；室温晾干；

(2)使用PBS配置1％的脱脂奶粉或者BSA，将上述的固相载体置于其中封闭，室温，振荡110rpm，1h；

(3)PBS-T洗涤3次，每次5～10min；室温甩干；

(4)室温晾干后，向载体上的点分别滴加一系列浓度梯度的病原菌悬液和病原菌混合液，37℃，反应1～2h；

(5)PBS-T洗涤3次，每次5～10min；室温甩干；

(6)向载体上的点分别滴加标记的抗体，37℃孵育1-2h；

(7)PBS-T洗涤3次，每次5～10min，加TMB避光发色20min，使用1mol/L硫酸终止反应，去离子水漂洗5次，室温甩干；

(8)扫描仪扫描，记录实验结果。