[发明专利]一种灰毛豆内生真菌发酵制备(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮化合物的方法

说明书

一种灰毛豆内生真菌发酵制备(R)‑4‑苄基‑2‑噁唑烷酮化合物的方法，是以保藏号为CCTCC NO：M 2017408的灰毛豆内生真菌淡紫拟青霉菌(Purpureocilliumlilacinum)TPL04作为发酵菌株获得发酵液，将发酵液分离纯化得到化学合成中常用的多用途的不对称合成手性助剂(R)‑4‑苄基‑2‑噁唑烷酮化合物。本方法所得目标化合物纯度高、产率可观，并且分离纯化过程简单、所用试剂填料经济，为(R)‑4‑苄基‑2‑噁唑烷酮的生产制备开创了新途径，并提供了菌种来源。

技术领域

本发明属于生物化工领域，涉及(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮化合物的制备方法，具体涉及一种从灰毛豆内生真菌发酵制备(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮化合物的方法。

背景技术

4-苄基-2-噁唑烷酮，根据分子中3位手性碳构型的不同分为：(R)-型、(S)-型两个异构体，其中(S)-4-苄基-2-噁唑烷酮的旋光值为负值，而(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮对应的旋光值为正值。该化合物的两种异构体都是重要的手性辅剂，在不对称合成中有广泛的应用；同时也是重要的医药中间体，可用于合成HIV蛋白酶抑制剂等。如穆博帅等(2017)以(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮为手性助剂，不对称合成制备具有光学活性的2-甲氧基-4-氟苯基-1,5-苯并硫氮杂卓类化合物；Brimble等(1998)以(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮为手性助剂实现环戊二烯的Diels-Alder不对称加成反应。

中国专利200510029672.6公开了一种4-取代手性恶唑垸酮类化合物的制备方法，介绍了有关4-苄基-2-噁唑烷酮的化学合成，均是从天然的L-苯丙氨酸或D-苯丙氨酸出发，先还原成氨基醇，再关环合成。在以上合成方法中，所用的还原剂(LiAlH4,NaBH4/I2,NaBH4/H2SO4,LiBH4/Me3SiCl,BH3·Me2S)有一定毒性、强腐蚀性，且具有价格昂贵、步骤复杂或反应时间较长等问题。

另外，2014年裴晓丽等从灰毛豆植物叶片中也分离报道了(S)-4-苄基-2-噁唑烷酮，是首次发现该化合物的(S)-构型以植物次生代谢产物形式存在于自然界，但该报道没有涉及(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮。

截至目前，通过化学合成或从灰毛豆叶片中分离，是获得4-苄基-2-噁唑烷酮已知的所有途径，而本发明所涉的一种通过对真菌发酵，从发酵产物中制备目标产物(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮的方法，与现有化学合成途径相比具有能耗小、避免使用毒性、腐蚀性试剂等优势，绿色环保；与从植物材料中分离纯化途径相比，其不受植物材料的生长期漫长、材料收集有限性的影响，可大规模室内发酵获取，可控性强等诸多优势。基于此，本发明筛选获得一株产自植物灰毛豆叶片的内生真菌淡紫拟青霉(Purpureocilliumlilacinum)TPL04，通过发酵可制备化合物(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮化合物的方法，该发明为重要手性助剂(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮的制备开创了菌种来源和方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种操作简便的以灰毛豆内生真菌发酵制备(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮化合物的方法。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种灰毛豆内生真菌发酵制备(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮化合物的方法，该方法步骤如下：

A、以保藏号为CCTCC NO：M 2017408的灰毛豆内生真菌淡紫拟青霉菌(Purpureocilliumlilacinum)TPL04作为发酵菌株，制备该菌株的发酵液；