[发明专利]胚胎植入前染色体异常检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种胚胎植入前染色体异常检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

随着我国环境污染以及生育年龄推迟，不孕不育率越来越高。据统计，国内平均每8对育龄夫妇中就有1对不能正常受孕，因此越来越多的人选择辅助生殖技术，目前以试管婴儿为代表的体外授精技术已经成为不孕不育治疗的主流选择。美国疾病控制与预防中心(CDC)统计了2004年到2013年间进行辅助生殖助孕的周期数，到2013年，美国辅助生殖年周期数接近16万，其中进行试管婴儿的周期占其中的99％。但目前为止，即使是技术最好的辅助生殖中心，活产率也只有30％左右。其主要原因是由于胚胎染色体异常而导致反复植入失败，而通过对胚胎染色体进行植入前遗传学筛查，选择正常的胚胎进行移植，可以显著地提高辅助生殖的成活率。

在试管婴儿实施过程中，关键的一步是挑选出优质的胚胎进行植入，传统的方法主要是胚胎形态学观察，但是形态学观察的结果易受观察者主观影响，且各医疗机构评分系统标准不统一，通过植入前遗传学筛查可大大提高试管婴儿的妊娠率和活产率。目前，临床上进行植入前遗传学筛查的方法主要包括Fish，Array CGH等，然而这两种技术都存在一定的局限：FISH技术目前存在的问题在于通量低，一次只能检测几条染色体，且操作繁琐，受到荧光信号的影响，分辨率低；ArrayCGH的缺点在于只能检测已知的染色体异常，且在检测过程中需要加入对照样本，通过与对照样本的信号对比进行结果的分析，这种方法极大的受限于杂交信号的影响。而利用半导体高通量测序法进行植入前遗传学筛查，一次可以检测全部23对染色体，通过构建正常样本数据库进行样本分析，不需要每次检测都加入正常对照，检测的通量可达到25个样本以上一个反应且检测染色体异常的分辨率达到4M。该技术既弥补了FISH在准确度和检测通量方面的缺陷，又降低了单个样本的检测成本，同时提高了检测准确度，已经成为未来PGS检测的发展方向。

不同检测技术对比表

发明内容

本发明公开了一种胚胎植入前染色体异常检测试剂盒，以解决现有技术存在的操作繁琐，效率低下等问题。

本发明还要解决的技术问题是提供上述试剂盒的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种检测胚胎植入前染色体异常检测试剂盒，该试剂盒包括：单细胞扩增试剂、片段化试剂、文库构建试剂、DNA纯化试剂和阴阳性质控品；

其中，

所述的单细胞扩增试剂包括：细胞提取缓冲液310μl、细胞裂解缓冲液310μl、细胞裂解酶20μl、预扩增缓冲液300μl、预扩增酶20μl、扩增缓冲液1.5ml和扩增酶60μl；

所述的片段化试剂包括：片段化缓冲液120μl、片段化酶120μl和终止反应缓冲液300μl；

所述的文库构建试剂包括：末端修复缓冲液550μl、末端修复酶27μl、连接缓冲液275μl、DNA连接酶55μl、PCR酶混合液2.6ml、PCR引物混合液137μl、P1接头60μl、无核酸酶水3.8ml和特异性接头1～25各8μl；

单细胞扩增试剂、片段化试剂、文库构建试剂的主要组分如下表所示：

其中，

所述的DNA纯化试剂包括：DNA纯化磁珠20ml和DNA洗脱液7.8ml；

所述的阴阳性质控品包括：核型为21号染色体三体的阳性质控品1、核型为XO染色体异常的阳性质控品2和染色体正常的阴性质控品。

其中，所述的核型为21号染色体三体的阳性质控品由如下方法制备得到：

从核型为21号染色体三体的阳性细胞系样本中取3～5个细胞，在-80℃下密封保存备用。

其中，所述的核型为21号染色体三体的阳性细胞系样本由21三体核型细胞通过常规细胞培养方法进行复苏和传代培养所得。

其中，所述的核型为XO染色体异常的阳性质控品由如下方法制备得到：

从核型为XO染色体异常的阳性细胞系样本中取3～5个细胞，在-80℃下密封保存备用。

其中，所述的核型为XO染色体异常的阳性细胞系样本由XO核型细胞通过常规细胞培养方法进行复苏和传代培养所得。

其中，所述的染色体正常的阴性质控品由如下方法制备得到：