[发明专利]一种特异性敲减人BRCC3基因慢病毒的构建及在肺癌中的应用

权利要求书

1.一种特异性敲减人BRCC3基因的shRNA序列，其包括下述1)和2)中的至少一个双链核苷酸序列：

1)正义链为RNAi-1-F的核苷酸序列，反义链为RNAi-1-R的核苷酸序列；

2)正义链为RNAi-2-F的核苷酸序列，反义链为RNAi-2-R的核苷酸序列；

RNAi-1-F：

CcgggcCGTCAGAATTGTTCACATTCTCGAGAATGTGAACAATTCTGACGGCTTTTTg

RNAi-1-R：

aattcaaaaagcCGTCAGAATTGTTCACATTCTCGAGAATGTGAACAATTCTGACGGC

RNAi-2-F：

CcgggaGCACAGAGAAGGAGGAAGTCTCGAGACTTCCTCCTTCTCTGTGCTCTTTTT

RNAi-2-RaattcaaaaagaGCACAGAGAAGGAGGAAGTCTCGAGACTTCCTCCTTCTCTGTGCTC。

2.如权利要求1中任一所述的能特异性敲减人BRCC3基因的shRNA序列，其特征在于：所述的能够特异性敲减人BRCC3基因的shRNA序列可应用于制备治疗肿瘤药物。

3.一种特异性敲减人BRCC3基因的慢病毒的构建方法，其包括如下步骤：

Step1,通过PCR合成权利要求1中能特异性敲减人BRCC3基因的shRNA序列；

Step2,构建能特异性干扰BRCC3基因的重组质粒；

Step3,包装能特异性干扰BRCC3基因的慢病毒；

Step4,筛选验证Step3中的能够特异性干扰BRCC3基因的慢病毒；

Step5,观察Step3中能够特异性干扰BRCC3基因的慢病毒对肺癌细胞生物学功能的影响。

4.如权利要求3所述的特异性敲减人BRCC3基因的慢病毒的构建方法，其特征在于：所述的步骤Step1中，选用限制性内切酶Age I和EcoR I，分别于靶序列的5’端和3’端加上AgeI、EcoR I限制性内切酶位点。

5.如权利要求3所述的特异性敲减人BRCC3基因的慢病毒的构建方法，其特征在于：验证Step3中慢病毒的方法，可以直接利用Western blot验证BRCC3蛋白的表达，和/或采用实时荧光定量PCR。