[发明专利]一种嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明公开了一种基于纳米抗体的嵌合抗原受体CD38Nb‑CD8α‑CD137‑CD3ζ及其应用。该嵌合抗原受体包括依次串联的抗人CD38纳米抗体、人CD8α铰链区和跨膜区、人CD137胞内区和CD3ζ胞内区。该嵌合抗原受体用于修饰T淋巴细胞，修饰后的T细胞(CAR‑T细胞)能用于表面CD38阳性的肿瘤的治疗。

技术领域

本发明涉及肿瘤的细胞免疫治疗领域，具体涉及一种依次串联的CD38Nb-CD8α-CD137-CD3ζ的嵌合抗原受体及其在制备CAR-T细胞、肿瘤治疗中的应用。

背景技术

近年研究发现，以肿瘤特异性单克隆抗体的单链可变区(scFv)取代TCR的α和β链可变区，并将scFv直接和共刺激分子(如CD28、CD137等)以及T细胞信号传导区域CD3ζ连接，形成嵌合抗原受体(CAR)表达于T细胞表面，可通过scFv识别肿瘤特异性抗原，直接产生T细胞活化的第一、第二信号，促进T细胞活化、增殖，特异性杀伤肿瘤细胞。该过程主要依赖CAR-T细胞表面的scFv对肿瘤抗原的特异性识别，免疫反应的特异性和杀伤性增强。

多发性骨髓瘤(MM)是常见的血液系统恶性肿瘤，单克隆浆细胞恶性增殖并分泌大量单克隆免疫球蛋白，正常多克隆浆细胞增生和多克隆免疫球蛋白分泌受到抑制，引起广泛骨质破坏、反复感染、贫血、高钙血征、高粘滞综合征、肾功能不全等一系列临床表现并导致不良后果。目前治疗手段包括化疗、蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂、单克隆抗体和造血干细胞移植等，效果仍不理想，CAR-T细胞有望成为治疗MM的新方法。

发明内容

本发明提供一种嵌合抗原受体CD38Nb-CD8α-CD137-CD3ζ，该嵌合抗原受体包括依次串联的抗人CD38纳米抗体1G3(CD38Nb)、人CD8α铰链区和跨膜区、人CD137胞内区和CD3ζ胞内区；其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示；其核酸序列如SEQ ID NO.2所示。

该嵌合抗原受体含有的抗人CD38纳米抗体(CD38Nb)，其氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示，其核酸序列如SEQ ID NO.4所示。

该嵌合抗原受体以人CD8α铰链区和跨膜区、人CD137胞内区和CD3ζ胞内区串联而成的结构为信号传导结构域，其氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，其核酸序列如SEQ IDNO.6所示。

该嵌合抗原受体的氨基末端还含有一个CD8α信号肽，其氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO.7所示，其核酸序列如SEQ ID NO.8所示。

该嵌合抗原受体的CD8α信号肽和抗人CD38纳米抗体序列之间含有1个Myc标签，其氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO.9所示，其核酸序列如SEQ ID NO.10所示。

该嵌合抗原受体中的T细胞共刺激信号分子除了是CD137-CD3ζ，还可以是CD28-CD3ζ或CD28-CD137-CD3ζ。

所述的嵌合抗原受体在制备嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)及其在肿瘤治疗中的应用。