[发明专利]一种用于鹿科动物鉴定的引物及其应用

说明书

本发明提供了一种用于鹿科动物鉴定的引物及其应用。本发明的引物包括第一引物与第二引物，其中，第一引物为15～40bp且包括如SEQ ID No.1所示序列中的至少15bp的片段；第二引物为15～40bp且包括如SEQ ID No.2所示序列中的至少15bp的片段。本发明的引物对鹿科动物特异性较好，产物片段长度合适，并有很好的扩增效率，很好的解决了同类研究中扩增困难、容易得到错误序列信息的问题。

技术领域

本发明是关于一种用于鹿科动物鉴定的引物及其应用。

背景技术

DNA条形编码(DNA Barcoding)技术是一种新的生物分类方法，它是分子生物学和生物信息学相结合的产物。这一概念认为，对地球上每一种生物能通过快速分析其DNA中的一小段加以识别。在最近几年里，该技术已成为生物分类学中研究的热点，在生物分类鉴定中具有重要作用，线粒体细胞色素C氧化酶I亚基(mtCOI)作为动物界DNA条形码的推荐序列在不同研究者和研究类群中得到了广泛的应用。

2009年以后，随着DNA提取技术、PCR技术及高通量测序技术的发展，特别是DNA条形码技术的推广和应用，广泛认可作为DNA条形码技术首选的线粒体COI基因被大量应用于国内对于鹿科动物的研究中。

在鹿科动物的亲缘关系研究中，连虹(2009)对我国的16种珍稀濒危野生动物进行了DNA条形码研究，范围涵盖鹿科、麝科、牛科、骆驼科(Camelidae)和马科(Equidae)，共计15属。基于655bp和404bp两段COI序列分析，讨论了鹿科动物与其他近源物种的系统发育关系。

在药材快速鉴定方面，COI基因作为DNA条形码的推荐序列，也被广泛应用于鹿科动物，如鹿茸饮片(张蓉等，2011；崔丽娜等，2012)、鹿类动物中药材(刘冬等，2014)。

此外，鹿科动物及其相关制品作为贸易品具有广泛的应用市场，其中不乏各种混伪品，传统方法往往难以辨别或需要较长时间的专业训练，因此，能够进行快速鉴定的DNA条形码技术在此类研究中得到了广泛的应用(Cai et al.，2015；Luo et al.，2013)。

蛋白质分析、PCR技术、DNA测序技术等新技术出现后，分子系统学及DNA分子技术的快速发展，对原有的形态学理论产生了质疑。EmersonTate(1993)用蛋白电泳分析了鹿亚科4个属10个种和亚种的进化关系，提出了新的观点，他们认为麋鹿属(Elaphurus)与鹿属(Cervus)关系较近，而鹿属中的水鹿(C.unicolor)与黇鹿属(Dama)和斑鹿属(Axis)的关系比其与鹿属其他种的关系更近。而Randi et al.(2001)基于mtDNA的D-loop全序列分析，探讨了鹿亚科(Cervinae)、麂亚科(Muntiacinae)25个种和亚种的系统发生关系。PolziehnStrobeck(2002)基于mtDNA控制区的DNA序列对传统分类所建立的马鹿(C.elaphus)各个亚种进行了系统发育分析，认为传统分类上的马鹿并不是一个单系类群，应分为主要分布于欧洲、北非至中亚地区的赤鹿(欧洲马鹿)(C.elaphus)和分布于北美及东亚及西伯利亚地区的马鹿(加拿大马鹿)(C.canadensis)，前者在我国仅有塔里木赤鹿(C.elaphus yarkandensis)一个亚种。Hassanin et al.(2012)对现生鲸偶蹄目(Cetartiodactyla)物种的210条mtDNA完成全长测序，包含107属183种，并基于mtDNA全长序列重建了现生鲸偶蹄目物种的系统发育树，明确了进化分歧事件，并通过分子钟校正估算了演化时间。其结果显示鹿科动物与麝科(Moschidae)、牛科(Bovidae)有较近的亲缘关系，这一分支约在晚渐新世至早中新世由鲸偶蹄目分出，而麝科与牛科动物亲缘关系较近，且不同于传统分类学观点，认为麝科较鹿科晚分化，属于较进化的类群。