[发明专利]一种具有益生功能的益生固态乳酸菌菌剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种具有益生功能的益生固态乳酸菌菌剂的制备方法。

背景技术

活性乳酸菌菌剂具有促进肠胃消化吸收、调节肠道微生态平衡、提高机体免疫力、防病保健等功能。同时，乳酸菌制剂因其天然可食用、无毒副作用、安全可靠和易大规模发酵等优势，广泛应用于食品保健、畜牧饲料、水产养殖、微生物发酵和环境保护等行业。然而，目前市售乳酸菌多为液体菌剂，其剂型单一且保存期相对较短，而固态乳酸菌制剂不仅口感细腻，而且便于储存和运输。因此，乳酸菌固态活性菌剂的开发和制备具有广阔的市场潜力。

目前，有关具有显著益生功能的益生固态乳酸菌菌剂工艺研究较少，配方有待优化升级。专利CN1369553A公开了一种制备活性乳酸菌固态制剂的方法，该发明添加固体淀粉质碳源和多种氮源，采用糖化曲霉分解淀粉，并通过低温干燥制备为固态制剂。该发明所述工艺简单易行，产品便于保存，但是发酵菌活不高，且产物营养益生物质单一。专利CN1400304A公开了一种微生态制剂的液—固结合发酵工艺，该发明的固体发酵环节在厌氧塑料袋中进行，固体基质成分简单、发酵规模受限。专利CN103392911A公开了一种饲用高活性乳酸菌固态制剂及其制备方法，该发明采用的粘接剂为梭甲基纤维素钠或微晶纤维素、聚丙烯酸树脂Ⅱ，包衣剂为聚丙烯酸树脂、海藻酸钠或氯化钙，该原料虽然能很好的完成固态制剂造粒，但是这些成分不是有益于肠道益生菌生长和定植的物质，且肠道益生功能未表明。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种具有益生功能的益生固态乳酸菌菌剂的制备方法，该方法经济环保，生产工艺简单高效，生产成本低；产品无异味，口感柔和，有天然发酵乳香味；固态菌剂制备的冷冻保护剂采用的全是有助于对肠道益生菌增殖的原料；乳酸菌具有高酸、胆盐耐受能力和胆固醇脱除能力，在模拟人工胃肠液中存活率高，具有良好的益生保健功能。

本发明是通过如下技术方案实现的，本发明提供一种具有益生功能的益生固态乳酸菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将添加脱脂奶粉的培养基灭菌，冷至室温后接入乳酸菌发酵菌种，恒温发酵至脱脂奶粉乳凝固，PH＝4.0-4.5时发酵结束，搅拌、冷却至室温，制得乳酸菌活菌剂；

(2)取乳酸菌活菌剂离心并收集菌体，弃上清液后吸取菌悬液，将菌悬液和冻干保护剂混匀；其中冻干保护剂为蒙脱土、海藻糖、普鲁兰多糖、谷胱甘肽、抗性淀粉、甘油、异VC酸、水中的一种或几种混合；

(3)将混匀后的菌悬液倒入待冻干的器皿中预冷冻。

作为优选，所述乳酸菌发酵菌种来源于青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、长双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、保加利亚乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌、格式乳杆菌、瑞士乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗依氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和唾液乳杆菌中的一种或几种混合。

本发明所使用的“W/V”是指重量体积比，即g/ml或kg/L。

作为优选，步骤(1)中，所述培养基的配方中添加10-15％(W/V)脱脂奶粉，以及以下混合物：

作为优选，步骤(1)中，在培养基上按1～3％的比例接入乳酸菌发酵菌种。

作为优选，步骤(1)中，发酵温度为30℃-39℃。发酵时间为5-8h，发酵过程中还可以控制氧气的量，一般在有氧或微好氧条件下发酵培养，当选择微好氧条件发酵时，氧气的量为0～0.5mg/L溶解氧。

作为优选，步骤(2)中，取乳酸菌活菌剂后采用6000r/min离心5min收集菌体。

作为优选，步骤(2)中，加入的冻干保护剂为甘油0.5-2.5％(W/V)、海藻糖3.0-5.0％(W/V)、抗性淀粉1.0-3.0％(W/V)、普鲁兰多糖1.0-3.0％(W/V)、异VC酸0.1-0.5％(W/V)，谷胱甘肽0.2-0.5mM，蒙脱土0.1-1.0％(W/V)，水5-70％(W/V)中的一种或几种混合。

作为优选，步骤(2)中，所述冻干保护剂和菌悬液混合的比例为4:1～8:1。

作为优选，步骤(2)中，将菌悬液和冻干保护剂混匀后需要平衡30min。

作为优选，步骤(3)中，预冷冻参数为：混匀后的菌悬液在4℃冰箱内平衡30min后，移入-30℃冰箱内平衡60min，再移入冷冻干燥剂中冷冻干燥。