[发明专利]一种胰高血糖素多克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种胰高血糖素多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括：

步骤1、利用碳二亚胺法将胰高血糖素与牛血清蛋白进行偶联，得到免疫抗原；

步骤2、将免疫抗原免疫兔子，取血离心，所得抗血清为胰高血糖素多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1为：

称取胰高血糖素和N-羟基琥珀酰亚胺完全溶于DMF中，再加入DCC反应，反应液离心后收取上清液，将上清液滴加到溶有BSA的缓冲液中进行反应，然后将所得反应液透析，得到免疫抗原。

3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤1为：

称取0.1mmol胰高血糖素，0.15mmol N-羟基琥珀酰亚胺完全溶于1ml的DMF中，再加入0.12mmol的DCC，置于4℃下反应搅拌12小时或搅拌过夜；反应后将反应液10000r/min离心10min，离心后收取上清液，将上清液缓慢滴加到溶有2mmol BSA的PBS中，4℃下反应搅拌12小时或搅拌过夜；反应后将反应液放入透析袋中，在4℃条件下用PBS透析三天，每天换三次透析液，得到免疫抗原。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2为：

用磷酸缓冲盐溶液将步骤(1)所得免疫抗原配制成免疫抗原溶液免疫兔子，第一次免疫时取1ml的免疫抗原溶液与等体积的弗氏完全佐剂，用乳化器进行乳化，使其完全混为一相，采用皮下多点注射的方式对每只兔子免疫注射2ml；

首次免疫两周后进行加强免疫，加强免疫时用等体积的弗氏不完全佐剂与1ml免疫抗原溶液混合用乳化器进行乳化使其完全混为一相，采用皮下多点注射的免疫方式对每只兔子注射2ml，之后每隔两周进行加强免疫一次；对兔子进行加强免疫4次后，于最后一次免疫一周后对兔子耳部静脉取血，将收集到的血液置于4℃冰箱过夜，第二天离心分离取上清液，得到胰高血糖素多克隆抗体。