[发明专利]与伪狂犬病病毒gD蛋白结合的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及特异性结合伪狂犬病病毒gD蛋白的鼠单克隆抗体的可变区序列，其为鼠单克隆抗体3B6的可变区序列或鼠单克隆抗体5G7的可变区序列；本发明还涉及由鼠单克隆抗体3B6可变区序列中的重链可变区序列或其保守性变异体，和/或轻链可变区序列或其保守性变异体组成的抗体，及由鼠单克隆抗体5G7可变区序列中的重链可变区序列或其保守性变异体，和/或轻链可变区序列或其保守性变异体组成的抗体。含所述抗体的ELISA检测试剂盒，克服了PRVgD蛋白与其它蛋白串联表达或融合表达后无法准确定量、预期表达效果无法验证的技术难题，解决了配制疫苗的关键问题。同时，含所述抗体的药物组合物，具有广谱性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及与伪狂犬病病毒gD蛋白结合的单克隆抗体及其应用。

背景技术

伪狂犬病，又称Aujeszky氏病，是由疱疹病毒科(Herpesviridae)α亚科中的猪疱疹病毒Ⅰ型(Suid herpesvirus 1strain，亦称伪狂犬病病毒Pseudorabies virus，PRV)所引起的猪、牛、羊、犬、猫、兔、鼠、野猪、貂、熊和狐等多种家畜、野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主症的急性传染病。

猪的伪狂犬病在我国广泛存在，危害严重，是制约规模化猪场生产的主要疾病之一，可引起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊胎，仔猪出现神经症状、麻痹、特别地20周龄内感染后100％死亡率，以及大中猪呼吸道症状等。研究表明以PRVgB、gC、gD蛋白为主的亚单位疫苗能够给免疫动物特别是猪提供相应的保护，不仅能使猪免遭猪伪狂犬病的侵袭，还能使猪免受猪伪狂犬变异株所引发的伪狂犬病，特别地以三种蛋白中的两者或三者的串联表达或融合表达效果最为显著。但通过基因工程手段串联表达或融合表达后的蛋白存在的难题在于，其仅能通过常用的BCA或Bradford方法定量表达后的总蛋白含量，无法准确定量各自蛋白表达的含量，进而不能确定各蛋白是否达到预期的表达效果，导致无法追溯所配制的亚单位疫苗免疫动物后产生效果所对应的具体成分含量。

犬也是对PRV较为敏感的动物，截止目前犬感染PRV引起的发病和死亡屡有发生。例如刘蕾等在中国畜牧兽医学会小动物医学分会第六次学术研讨会暨中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十八次学术研讨会上报道的“关注伪狂犬病患犬，它就在你面前”，公开了犬由于食用患有伪狂犬病的猪肉而发生伪狂犬病，并且从脑组织中扩增出了目的基因片段。犬感染PRV后潜伏期为3-6天，一旦发病，多在36小时内死亡。这一危害日趋严重，给众多养犬者、养殖业带了较大的经济损失和严重的心理创伤。因此，亟需研发一种预防和/或治疗该病的药物，该药物可用于多种患病动物，不受动物种属的限制。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供了能够与伪狂犬病毒gD蛋白结合的抗体。含所述抗体的ELISA检测试剂盒，克服了PRVgD蛋白与其它蛋白串联表达或融合表达后无法准确定量、预期表达效果无法验证的技术难题，解决了配制疫苗的关键问题。同时，含所述抗体的药物组合物，可以不分种属地预防和/或治疗猪源、犬源所引发的伪狂犬病。

为此，本发明第一方面提供了特异性结合伪狂犬病病毒gD蛋白的可变区序列，其为鼠单克隆抗体3B6的可变区序列，所述鼠单克隆抗体3B6的可变区序列中，重链可变区氨基酸序列为：序列SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，或序列SEQ ID NO.2经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；轻链可变区氨基酸序列为：序列SEQ IDNO.4所示的氨基酸序列，或序列SEQ ID NO.4经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；

和/或为鼠单克隆抗体5G7的可变区序列，所述鼠单克隆抗体5G7的可变区序列中，重链可变区氨基酸序列为：序列SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，或序列SEQ ID NO.6经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；轻链可变区氨基酸序列为：序列SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，或序列SEQ ID NO.8经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体。